【摘要】：牛多殺性巴氏桿菌主要引起牛肺炎,在世界各地廣泛流行和分布,影響著養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。多殺性巴氏桿菌根據(jù)莢膜抗原可分為A、B、D、E和F型5個血清型。多殺性巴氏桿菌的毒力因子種類繁多,但對其致病機制及相關毒力因子的作用仍有待于進一步研究。本研究在確定牛莢膜A型多殺性巴氏桿菌的基礎上,通過動物試驗及部分多殺性巴氏桿菌毒力基因的擴增篩選出強毒株與弱毒株,并將強、弱毒株進行轉(zhuǎn)錄組測序分析。將差異表達基因進行分析,篩選毒力基因并富集到KEGG_-map上,綜合分析多殺性巴氏桿菌的致病機制。1.牛源多殺性巴氏桿菌的分離鑒定本研究采集疑似感染牛肺炎的病料進行細菌的分離,通過生化鑒定及多殺性巴氏桿菌特異性引物對分離菌株進行鑒定,共分離出12株多殺性巴氏桿菌,并采用PCR技術對12株多殺性巴氏桿菌進行莢膜血清型鑒定,結果表明12株菌株均為莢膜A型多殺性巴氏桿菌。2.基于強、弱毒株轉(zhuǎn)錄組學分析通過動物試驗及多殺性巴氏桿菌部分毒力基因擴增篩選出強毒株與弱毒株,利用轉(zhuǎn)錄組學分析,從cDNA文庫中篩選到72個差異表達的基因。顯著性分析發(fā)現(xiàn),在強、弱毒株中共有69個表達基因下調(diào)和3個表達基因上調(diào)。本次測序結果顯示弱毒株與強毒株相比毒力基因Znua與Rope表達顯著下調(diào)。3.DnaJ蛋白的提純及功能驗證在轉(zhuǎn)錄組學測序結果中弱毒株Dnaj表達下調(diào)最為顯著。在本研究中,將Dnaj基因與pET-28a載體連接,構建重組質(zhì)粒,并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入DE3細胞中,經(jīng)IPTG誘導表達,獲得大小約為37.8kDa的重組蛋白。通過親和層析法(Ni-NAT)純化DnaJ蛋白。將純化的蛋白免疫小鼠,通過Western blot對DnaJ蛋白的免疫原性做出初步分析。
【圖文】：

化試驗結果圖 1.1 染色結果A）革蘭氏染色鏡檢結果（1 000×）（B）美蘭染色鏡檢結果（1 000×）Fig.1.1 The dyeing resultsA）Gram staining result（1 000×）（B）Methylene blue staining result（1 0

濃度試驗結果分析圖 1.3 hyaD-hyac 基因擴增結果M: DL-2000 Marker; Pm-1—Pm-12:多殺性巴氏桿菌Fig.1.3 PCR amplification of hyaD-hyacM: DL-2000 Marker; Pm-1—Pm-12: Pasteurella multocida
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.61

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 賈昌路;張瑤;朱玲;張銳;;轉(zhuǎn)錄組測序技術在生物測序中的應用研究進展[J];分子植物育種;2015年10期

2 蔡廣強;;多殺性巴氏桿菌毒力因子研究進展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2013年06期

3 陳光宏;賀曉龍;;豬源多殺性巴氏桿菌的分離鑒定與藥敏試驗[J];畜牧與獸醫(yī);2012年08期

4 劉萬飛;王西亮;趙宇慧;曾p瑤;耿佳寧;胡松年;;基于第二代測序技術的細菌基因組與轉(zhuǎn)錄組研究策略簡介[J];微生物學通報;2011年11期

5 馬曉菁;王靜梅;剡根強;;犢牛肺炎多殺性巴氏桿菌的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)學報;2010年09期

相關博士學位論文 前1條

1 湯細彪;豬源多殺性巴氏桿菌的分子流行病學與致病性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

相關碩士學位論文 前2條

1 王林柏;多殺性巴氏桿菌△rpoE突變株的構建及其生物學特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2016年

2 孔令聰;牛源莢膜血清A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及對喹諾酮類抗生素耐藥機制研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2013年

，

本文編號：2613829