發(fā)布時(shí)間：2020-04-01 21:43

【摘要】：本研究以內(nèi)蒙古絨山羊皮膚成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,探討蛋氨酸、半胱氨酸和褪黑激素對(duì)細(xì)胞增殖、角蛋白以及相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響,進(jìn)一步探索能量和營養(yǎng)感應(yīng)分子AMPK-mTOR通路的變化規(guī)律。本論文試驗(yàn)研究分為五部分。試驗(yàn)一利用組織塊貼壁法對(duì)內(nèi)蒙古絨山羊耳尖皮膚進(jìn)行體外培養(yǎng)。對(duì)其進(jìn)行觀察、純化以及鑒定,并繪制生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)二向生長(zhǎng)期的成纖維細(xì)胞中添加半胱氨酸和蛋氨酸,研究了不同濃度的Cys和Met(1X=0.12 mM、5X=0.6 mM、10X=1.2 mM、20X=2.4 mM)對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響。試驗(yàn)三向成纖維細(xì)胞中添加不同比例的Cys和Met(1:1、1:3、1:5、3:1、5:1),研究了不同比例的兩種氨基酸對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響。試驗(yàn)四向成纖維細(xì)胞中添加褪黑激素,研究了不同濃度的MeL(0、100、300、500、700pg/m L)對(duì)成纖維細(xì)胞增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響。試驗(yàn)五在試驗(yàn)三和試驗(yàn)四的基礎(chǔ)上選取對(duì)成纖維細(xì)胞增殖作用較強(qiáng)的濃度1:1、3:1、500pg/ml、700pg/ml組進(jìn)行混合添加,研究了混合添加組對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的影響。本試驗(yàn)研究初步得到以下結(jié)果:(1)對(duì)培養(yǎng)好的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀察,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞呈長(zhǎng)梭型,為典型的成纖維細(xì)胞形態(tài);并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,呈典型的“S”型。(2)與對(duì)照組相比,添加不同濃度的Cys可以顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖(P0.05),在5X濃度組為最好。可以顯著上調(diào)PCNA、K10、K14、K15、P53、P21、BMP4、TGFβ、IVLmTOR等基因mRNA表達(dá)量;添加不同濃度的蛋氨酸可顯著抑制成纖維細(xì)胞的增殖,而顯著提高PCNA、CCND1、K14、K15,P21,BMP4、TGFβ、mTOR 的 mRNA 表達(dá)量;(3)與對(duì)照組相比,添加不同濃度的兩種氨基酸均可顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖(P0.05)。當(dāng)半胱氨酸的濃度不變,蛋氨酸的濃度逐漸升高時(shí),細(xì)胞增殖率在1:1組為最高,隨后逐漸降低。添加不同濃度的兩種氨基酸可以顯著提高細(xì)胞PCNA、CCND1、CDC42、K15、P53、LOR、IVL、TGF、mTOR mRNA 的表達(dá)量。當(dāng)?shù)鞍彼岬臐舛炔蛔?半胱氨酸的濃度逐漸升高時(shí),細(xì)胞增殖率在3:1時(shí)細(xì)胞增殖率達(dá)到最高,可以顯著提高基因 PCNA、CDC42、K14、K15、P53、IVL、TGFβ mRNA 表達(dá)量;(4)與對(duì)照組相比,添加MeL可以顯著促進(jìn)內(nèi)蒙古絨山羊成纖維細(xì)胞的增殖(P0.05)。在濃度為10 pg/ml組的相對(duì)增殖率為最低,在濃度為500pg/ml組的相對(duì)增殖率達(dá)到最高。單一添加MeL可以顯著提高相關(guān)基因CCND1、K14、K15、P53、BMP4、LOR、mTOR、P53mRNA 的表達(dá)量。(5)與對(duì)照組相比,混合添加組均可顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖(P0.05)。在1:1+500pg/ml組的相對(duì)增殖率達(dá)到最高,在1:1+700pg/m L組達(dá)到最低。混合添加組還可以顯著提高相關(guān)基因PCNA、K14、mTOR mRNA的表達(dá)量。
【圖文】：

圖１表皮的超微結(jié)構(gòu)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ邋ｕｌｔｒａｓｔｎｉｃｔｕｒｅ逡逑

圖２毛囊的結(jié)構(gòu)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｈａｉｒ邋ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ逡逑
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S827.5

【參考文獻(xiàn)】

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9 張霞;GSK3β通過mTOR/S6K1途徑對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳及增殖的調(diào)控[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

10 舒國濤;遼寧絨山羊次級(jí)毛囊年周期變化規(guī)律及其相關(guān)生物鐘基因研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

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本文編號(hào)：2610979