【摘要】：通遼是內(nèi)蒙古自治區(qū)的養(yǎng)牛大市,素有“黃牛之鄉(xiāng)”的美譽,近些年,隨著養(yǎng)牛數(shù)量的增加,犢牛腹瀉呈現(xiàn)逐年增長的趨勢,已嚴重影響到養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。產(chǎn)腸毒素型大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是導(dǎo)致犢牛腹瀉的主要致病菌之一,該菌導(dǎo)致犢牛發(fā)病且有較高的發(fā)病率及死亡率。如何制定有效合理的預(yù)防措施及高效安全的疫苗預(yù)防犢牛腹瀉大腸桿菌病迫在眉睫。本研究通過對通遼市地區(qū)從2015年4月年至2017年4月期間的各養(yǎng)殖場及散戶進行犢牛腹瀉大腸桿菌發(fā)病情況調(diào)查,并采集樣品,對犢牛糞便的致病菌分離純化。通過生化試驗、16S rRNA方法鑒定菌種,并確定其O-抗原血清型。經(jīng)鑒定共分離致病性大腸桿菌186株,其中O175是通遼本地區(qū)優(yōu)勢血清型,因其含有F41菌毛。采用PCR技術(shù)擴增分離菌菌毛F41毒力基因,并構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-F41,轉(zhuǎn)化至BL21中表達F41蛋白,通過Western blotting鑒定該蛋白的反應(yīng)原性。并通過軟件分析菌毛F41生物學特性。結(jié)果顯示,表達的F41蛋白有較好的反應(yīng)原性。生物信息學分析可知,F41蛋白為疏水性蛋白,理論等電點為5.02,該蛋白無跨膜螺旋區(qū),處于細胞膜外,亞細胞定位顯示分泌信號通路位點占比0.05,為非分泌蛋白,且蛋白具有良好的抗原性及柔韌性。本研究克隆表達的F41蛋白具有良好抗原性,相關(guān)生物學分析為今后的疫苗研究提供相應(yīng)參考依據(jù)。
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S858.23

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