【摘要】：脂肪組織對機體能量代謝和平衡具有重要作用，同時對于動物的肉質具有重要影響。肌間脂肪含量是影響牛肉的嫩度、多汁性和口味的重要因素之一。而前體脂肪細胞是具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化細胞，其增殖和分化會影響脂肪沉積及肌間脂肪含量，，進而影響牛肉肉質。 研究表明，TNNT1、HBA、HBB、MB、MYLPF、MYL1、PGAM2、MYL6B、HSPB1、TPI、MSRA、TNNI2、TNNT3、TCAP、TXN、PSMA1、GSTM1、COX6B1、VDAC1、GSTP1等基因在不同肌間脂肪沉積情況的牛肉中存在差異表達。本研究首先分離牛前體脂肪細胞，誘導其分化為成熟脂肪細胞，通過油紅O檢測脂類沉積情況，并通過實時熒光定量PCR及Western Blot檢測上述基因在前體脂肪細胞分化前后的mRNA及蛋白表達情況。結果表明，PSMA1、HBB、COX6B1、MYLPF、TPI、PGAM2、HBA、TCAP、GSTP1、MB、TXN、GSTM1、MYL6B、MSRA、HSPB1、TNNT1在前體脂肪細胞分化后mRNA和蛋白質的表達量上升，而VDAC1、MYL1表達量下降，TNNI2、TNNT3沒有檢測到表達。同時，前體脂肪細胞分化后脂質沉積明顯加大，說明這些基因可能在調節(jié)前體脂肪細胞分化、脂質沉積中具有潛在作用。 隨后，本研究選擇表達差異較大的PSMA1基因作為研究對象，探求其在牛的前體脂肪細胞分化及脂質沉積的作用。首先將合成的siRNA通過脂質體2000轉染至前體脂肪細胞中，特異性敲減PSMA1的表達，通過油紅O染色、甘油三酯含量檢測及熒光定量PCR法分別檢測脂質沉積情況及前體脂肪細胞分化標志基因的表達情況。結果表明，PSMA1的低表達會抑制脂肪細胞中脂滴形成和聚集，脂肪細胞甘油三酯累積減少，部分分化標志基因表達量顯著下降。這些結果對明確前脂肪細胞分化及脂質沉積機制、為在分子水平上調控牛脂肪沉積、改善肉質提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

（3）二抗孵育：取出 NC 膜，室溫下 1×TBST 搖床上漂洗 3 次，每次 5min。同方法稀釋二抗，于室溫搖床孵育2h。室溫下1×TBST漂洗3次，每次10min。（4）將膜放入化學發(fā)光儀中，在膜表面滴加化學發(fā)光液，顯影照相，灰度分析。3 實驗結果.1 分離出牛的前體脂肪細胞膠原酶消化分離出的腸系膜脂肪組織后，細胞單個漂浮于培養(yǎng)基中。培養(yǎng) 后有少量細胞貼壁，如圖 1.1 A，培養(yǎng) 8d 后，細胞形態(tài)變?yōu)殚L梭形，如圖 1.1

圖 1.2 誘導分化脂肪細胞油紅 O 染色Figure 1.2 Inducd adipocyte by oil red O staining.3.3 標志基因在分化前后表達情況比較.3.3.1 細胞總 RNA 提取結果根據(jù) Trizol 一步法操作步驟，提取分化前后脂肪細胞 RNA，經 1%瓊脂糖膠電泳鑒定，見圖 1.3，圖中無雜帶，28S、18S、5S 三條帶清晰，總 RNA 提比較完整，總 RNA OD260/OD280 比值在 1.8~2.0 之間，且樣品濃度均在00-600ng/μL 之間，可以用于后續(xù)的一系列實驗。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S823

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本文編號：2587007