發(fā)布時間：2019-10-15 11:25

【摘要】：目的：通過將兔肝球蟲接種至兔肝細胞中并在體外進行培養(yǎng),從而獲得兔肝球蟲病的發(fā)病病原即斯氏艾美爾球蟲。為進一步研究斯氏艾美爾球蟲的生活史、致病性以及針對此病的防治藥物和疫苗提供必要的前提條件。方法：將經(jīng)過驅(qū)蟲處理的幼兔致死后取出肝臟,進行原代細胞培養(yǎng),獲得穩(wěn)定的原代細胞后,再轉(zhuǎn)接到24孔培養(yǎng)板中；同時對從長治肉兔養(yǎng)殖場采集的病變肝臟,經(jīng)分離純化獲得雜質(zhì)較少的球蟲卵囊后,對其進行孢子化培養(yǎng),待孢子化率達到85%以上時,用機械研磨的方法對其進行破壁,分離子孢子；隨后將分離的球蟲子孢子接種到已長滿培養(yǎng)孔底部的兔肝原代細胞中,觀察其增殖情況,以獲得斯氏艾美爾球蟲卵囊；隨后將卵囊接種到健康幼兔體內(nèi)中,對其致病力進行驗證并對結(jié)果進行分析。結(jié)果:(1)兔肝原代細胞培養(yǎng)的實驗結(jié)果顯示：致死兔子后不放血的操作,較易獲得兔肝原代細胞。在培養(yǎng)約16h后出現(xiàn)零星的貼壁,約4-5d后出現(xiàn)穩(wěn)定的生長情況,經(jīng)20d左右的培養(yǎng)以及機械刮除干擾細胞后,可獲得活力較高的兔肝原代細胞。(2)斯氏艾美爾球蟲卵囊孢子化的實驗結(jié)果顯示：在濃度為2.5%的重鉻酸鉀溶液中,卵囊孵化的最佳溫度為32℃,經(jīng)過約5d可使斯氏艾美爾球蟲卵囊孢子化率達到85%以上。(3)接種斯氏艾美爾球蟲子孢子至細胞培養(yǎng)板的實驗結(jié)果顯示：剛接種斯氏艾美爾球蟲子孢子時,子孢子在顯微鏡下呈現(xiàn)中部稍微凹陷似彎曲的香蕉狀；約1h后子孢子的部分結(jié)構(gòu)已進入細胞內(nèi)部,1.5h后子孢子已全部進入細胞內(nèi)部；最初幾天無明顯變化,直至15d后在鏡下發(fā)現(xiàn)多量灰白發(fā)亮的球蟲體,部分肝細胞皺縮、脫落；在28d時已可見到結(jié)構(gòu)完整的球蟲卵囊,在34d時兔肝細胞大部分脫落與球蟲卵囊懸浮于細胞培養(yǎng)液中。(4)驗證實驗結(jié)果顯示：將經(jīng)2.5%的重鉻酸鉀溶液培養(yǎng)后的斯氏艾美爾球蟲卵囊接種到幼兔體內(nèi),1d后糞便開始出現(xiàn)卵囊,9-13d時達到高峰。此時幼兔均出現(xiàn)了程度不一的臨床癥狀,剖解后發(fā)現(xiàn)肝臟均存在不同程度的體積增大,肝表面及實質(zhì)內(nèi)有大量白色或淡黃色結(jié)節(jié),其他內(nèi)臟器官無明顯病理變化。結(jié)論:本實驗對斯氏艾美爾球蟲分離純化方法進行了改進和綜合,獲得了試驗所需的雜質(zhì)較少的斯氏艾美爾球蟲卵囊和子孢子。之后將兔肝細胞作為載體,在體外成功獲得了具有侵襲力的斯氏艾美爾球蟲卵囊。
【圖文】：

圖１斯氏艾美爾球蟲卵囊逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｏｏｃｙｓｔｓ邋ｏｆ邋Ｓｔｅｉｎｍａｎ打邋Ｅｉｍｅｒｉａ逡逑斯氏艾美爾球蟲的抱子生殖階段，其抱子等人的研究報道則認為是３４護６＂＾８１。在殖體可分為Ａ、Ｂ兩型或Ｈ型。洪凌仙肯定其裂殖生殖的代數(shù)。據(jù)現(xiàn)有資料記載，，的小配子體直徑為邋２０－２５＾ｍｌ，小配子發(fā)排列Ｗ后趨向四周，因其有２根鞭毛，因的線狀結(jié)構(gòu)靠近核處１５２１。大配子周圍有＾多與雞球蟲大配子類似的成囊壚粒結(jié)構(gòu)，察，可見大配子無微管，表面微孔的長和家兔致病性研究逡逑旅成因其主要寄生于家兔的肝臟、膽管

端稍圓壁薄。接種７ｄ時排出卵襄的數(shù)量明顯X椉櫻苑啾憔導(dǎo)煒杉罅康那虺媛壓義細�。随后几天卵囊数量急究濣w櫻匝閩D３中的幼兔到９ｄ時卵裹排出數(shù)量幾乎為接種逡逑６ｄ時排出量的２．５倍。由圖１０可見，排出的卵裹數(shù)量在此期間內(nèi)快速上升且與接種斯逡逑－２５－逡逑
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.7

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本文編號：2549608