【摘要】：本研究從北京某集團公司邢臺地區(qū)的肉雞場,采集疑似雞傳染性支氣管炎的發(fā)病雞病料,從中分離得到一株病毒,命名為XT株,并對其理化及生物學(xué)特性進行鑒定,最終通過基因的測序、對比,來分析它的遺傳變異性。無菌采集疑似患傳染性支氣管炎病雞的氣管、腎臟、腺胃等,研磨制成病毒液,在10日齡SPF雞胚上傳代,并收集尿囊液。尿囊液對雞紅細胞無直接血凝性,經(jīng)1%胰酶處理后出現(xiàn)血凝現(xiàn)象;新城疫干擾試驗顯示XT株F5代尿囊液對新城疫Lasota株在雞胚中的復(fù)制具有干擾作用,使其血凝效價下降了2~3個值;將XT株F5代尿囊液接種10日齡雞胚144 h后,與對照組相比,試驗組雞胚發(fā)育遲緩,經(jīng)SPSS V17分析兩組雞胚體重差異極顯著,說明XT株對雞胚具有致矮小作用;病毒回歸試驗動物后,雞只出現(xiàn)了典型的IBV臨床及解剖癥狀,且采集所有雞只病料分離得到的病毒液,經(jīng)IBV RT-PCR診斷試劑盒檢測,對照組均為陰性,試驗組絕大多數(shù)為陽性,說明試驗雞不同程度的感染了IBV。XT株理化特性試驗表明:該病毒對酸(p H 3.0)堿(p H 11.0)均敏感,并且病毒對酸的耐受力要比對堿的耐受力略強;經(jīng)56℃,1 h水浴加熱,毒力下降了3個滴度,而添加Mg2+組毒力下降不到2個滴度,說明病毒對熱敏感,Mg2+能提高其耐熱性;病毒對有機溶劑乙醚、氯仿均敏感,處理后毒力均下降了2~3個滴度,以上特性均符合傳染性支氣管炎病毒的相關(guān)特性。經(jīng)測定,XT株F5代病毒液的EID50為10-5.69/0.1ml;血清交叉中和試驗結(jié)果顯示:XT株與傳支疫苗株H120、W93的關(guān)系系數(shù)分別為77.98%、44.88%,依據(jù)判定標準(R80%,兩毒株為同一亞型;25%R80%,兩毒株為同一血清型的不同亞型;R25%,兩毒株為不同血清型),XT株與二者均為同一血清型的不同亞型。本試驗對XT株的S1基因、M基因進行了克隆測序,并與Genbank中已發(fā)表的18個參考株S1基因、M基因進行了比較分析,結(jié)果顯示,XT株S1基因與國內(nèi)常用疫苗株H120、H52、Ma5、M41、W93的同源性僅為76%~77%,而與山東分離株WF同源率較高,核苷酸同源率為91.3%,氨基酸同源率為90.9%,M基因序列對比結(jié)果與S1基因基本一致,但M基因與各參考毒株序列同源性總體較S1基因高,說明M基因較S1基因保守。序列對比結(jié)果顯示:XT株與當前國內(nèi)廣泛使用的疫苗株同源性較低,與一株山東分離株WF同源性較高。
【圖文】：

3.2 血凝試驗圖 2 接種 XT 株 F10 代病毒 144h 后雞胚Fig. 2 Dwarf embryo infected with F10 XTstrain after 144 h圖 1 正常雞胚（左）與接種 XT 株 F5 代病毒 144h 后雞胚（右）Fig. 1 Normal embryo (left) and dwarfembryo infected with F5 XT strainafter 144 h (right)

3.2 血凝試驗圖 2 接種 XT 株 F10 代病毒 144h 后雞胚Fig. 2 Dwarf embryo infected with F10 XTstrain after 144 h圖 1 正常雞胚（左）與接種 XT 株 F5 代病毒 144h 后雞胚（右）Fig. 1 Normal embryo (left) and dwarfembryo infected with F5 XT strainafter 144 h (right)
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

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本文編號：2524104