【摘要】：消化道線蟲(Nematodes in digestive canal)主要寄生在牛(包括牦牛)、羊、駱駝等反芻動物的消化道中。一般呈多蟲種混合感染,主要導致宿主消化道機械性損傷,并發(fā)胃腸道炎癥,食欲不振,貧血消瘦等癥狀,大量寄生時引起宿主消化道阻塞,嚴重時可造成宿主死亡,造成畜牧業(yè)經濟的極大損失。準確進行消化道線蟲分類,研究其遺傳變異關系和種群特征,對消化道線蟲病的防治和病原學研究均有重要意義。本研究以采自天祝白牦牛小腸的3種線蟲為對象,從分子鑒定和遺傳變異的角度分別進行了相關研究和分析。1.采用核糖體內轉錄間隔區(qū)序列擴增和測序的方法,對采自甘肅省天�？h國家保種動物白牦牛消化道的3種線蟲進行了研究。結果顯示腫孔古柏線蟲(Cooperia oncophora),環(huán)背帶線蟲(Teladorsagia circumcincta)和奧斯特線蟲sp.(Ostertagia sp.)的ITS序列長度分別為779bp,791bp和765bp。三種線蟲ITS序列的種內差異均在為0.5%以下。其中腫孔古柏線蟲與奧斯特線蟲的ITS序列差異最大,為13.6%~13.9%;腫孔古柏線蟲與環(huán)紋背帶線蟲ITS序列差異為12.9%-13.1%;環(huán)紋背帶線蟲和奧斯特線蟲ITS序列的差異最小,為4.3%~4.8%。通過對三種線蟲的ITS序列的比對分析可知,以ITS序列作為分子標記可以對不同蟲種進行準確鑒別。2.根據(jù)內轉錄間隔區(qū)序列的差異,利用PCR-RFLP技術成功建立了區(qū)分3種線蟲的分子生物學方法。結果顯示該技術可準確將3種形態(tài)相近的線蟲區(qū)分。試驗采用的限制性內切酶分別是Nde I和Eco R V,通過兩次酶切反應即將3種線蟲成功區(qū)別。其中,能被兩種酶切開的是腫孔古柏線蟲,只能被Nde I酶切開的是環(huán)背帶線蟲,兩種酶均無法切開的是奧斯特線蟲。相對于傳統(tǒng)形態(tài)學方法,此方法有操作簡便、區(qū)分效率高的特點。3.對采自甘肅省天祝縣西大灘鄉(xiāng)和抓西秀龍鄉(xiāng)白牦牛小腸的14條環(huán)背帶線蟲nad6基因全序列進行擴增、測序并分析。結果顯示,14條環(huán)背帶線蟲樣本的nad6全序列長度均為438bp,核苷酸種內差異為1.1-2.3%,氨基酸種內差異為0.7%-2.7%;進化樹顯示和環(huán)紋背帶線蟲日本株和印度株沒有明顯分支。對采自甘肅省天�？h西大灘鄉(xiāng)和抓西秀龍鄉(xiāng)白牦牛皺胃的15條腫孔古柏線蟲nad6基因全序列進行擴增、測序并分析。結果顯示,15條腫孔古柏線蟲樣本的nad6全序列長度均為438bp,核苷酸種內差異為0.9-1.8%,氨基酸種內差異0.7-1.4%;進化樹顯示和腫孔古柏線蟲澳大利亞株有明顯分枝。4.對腫孔古柏線蟲天祝株的線粒體全基因組進行了擴增并測序,結果表明腫孔古柏線蟲線粒體全基因組長度為13583bp,閉環(huán)結構,共包含36個基因,其中12個編碼蛋白的基因,22個t RNA,2個r RNA,無atp8基因。ITS序列比對顯示其和已發(fā)布的腫孔古柏線蟲的ITS序列差異在0.5%以下,但線粒體全序列和已發(fā)布的腫孔古柏線蟲GQ888713比對顯示差異為12.2%,超出了一般的種內差異,可以將其視為腫孔古柏線蟲的姊妹種。本研究結果完善了腫孔古柏線蟲遺傳進化的數(shù)據(jù)庫。本研究明確了甘肅省天�？h國家保種動物白牦牛的三種常見胃腸道線蟲的ITS序列,nad6序列和部分蟲種的線粒體全基因組,并建立了區(qū)分這三種線蟲的分子生物學方法,同時分析了其遺傳進化關系和群體結構,為我國的寄生蟲研究提供了基礎數(shù)據(jù),豐富了寄生蟲病的防治理論基礎。
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【學位授予單位】：甘肅農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.7
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本文編號：2405534