本文選題：沙門氏菌 + 快速檢測方法�。� 參考：《揚州大學》2017年碩士論文

【摘要】：沙門氏菌是世界范圍內人和動物的重要病原菌。動物源性食品是人感染沙門氏菌的主要來源,而雞和豬是國內最重要的動物源食品。因此,了解雞、豬飼養(yǎng)過程及食品加工過程中的沙門氏菌污染情況,對控制沙門氏菌的傳播、降低食品安全隱患有著重要的意義。為了縮短檢測時間,也為臨床診斷提供依據(jù),經(jīng)篩選、優(yōu)化制定了快速檢測沙門氏菌的PCR方法。應用所建立的方法對收集的臨床樣品進行篩查和沙門氏菌分離鑒定,對沙門氏菌分離菌株進行血清學鑒定、耐藥性表型及基因型分析以及MLST分子溯源研究,以闡明不同來源沙門氏菌菌株的內在關系,為沙門氏菌病的防控提供依據(jù)。一、沙門氏菌快速檢測方法篩選與優(yōu)化本方法基于國家標準《GB4789.4-2010食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》的常規(guī)方法,為縮短檢測時間,并且根據(jù)動物源樣本自身的特點,篩選并優(yōu)化了增菌方法,制定了快速檢測沙門氏菌的PCR方法,將沙門氏菌常規(guī)分離、鑒定方法中增菌的時間縮短至4～6 h,將原本2～3天的鑒定時間縮短到1天之內,達到快速檢測沙門氏菌的目的。二、雞源、豬源沙門氏菌MLST分子溯源及耐藥性研究對從江蘇地區(qū)雞源及豬源樣品中分離獲得的134株沙門氏菌,進行血清學分型和14種臨床常用藥物敏感試驗(包括氨芐青霉素、阿莫西林、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢哌酮、頭孢曲松、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星、萘啶酸、環(huán)丙沙星、四環(huán)素);另外,對沙門氏菌耐藥基因島(SGI)中主要的耐藥基因(包括β-內酰胺酶基因、sull、aacC4、aac(6')-1b、floR等)進行檢測,通過多位點序列分型(MLST)進行分子溯源分析,研究雞源、豬源沙門氏菌耐藥表型、基因型及傳播特征。134株沙門氏菌分為4個血清型:腸炎沙門氏菌、印第安納沙門氏菌、德爾卑沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。健康雞群分離株為腸炎沙門氏菌(36株)和印第安納沙門氏菌(40株),健康豬群分離株為德爾卑沙門氏菌(14株)和印第安納沙門氏菌(2株)。從揚州大學獸醫(yī)院收集的病禽樣品中沙門氏菌為腸炎沙門氏菌(31株)、印第安納沙門氏菌(6株)和雞白痢沙門氏菌(5株)。MLST分型結果表明,134株沙門氏菌可以分為6個ST型:ST11、ST17、ST92、ST40、ST64及ST155。腸炎沙門氏菌為ST11型,印第安納沙門氏菌為ST17型,雞白痢沙門氏菌為ST92型,德爾卑沙門氏菌分別為ST40、ST64及ST155。在所有沙門氏菌分離菌株中,對萘啶酸、氨芐青霉素、四環(huán)素和頭孢哌酮的耐藥性較高,分別達到92.5%、80.7%、72.5%和65.1%;其中腸炎沙門氏菌對萘啶酸、氨芐青霉素、四環(huán)素和頭孢哌酮的耐藥性較高,分別達到94.2%、89.8%、62.3%和57.9%;豬源德爾卑沙門氏菌對四環(huán)素、萘啶酸、磺胺甲嗯唑和氯霉素的耐藥性較高,分別達到100%、94.7%、68.4%和57.8%;印第安那沙門氏菌在14種抗生素中,對11種抗生素耐藥達到75%以上,且對所有的14種抗生素耐藥達50%以上。48株印第安納沙門氏菌共產(chǎn)生27種耐藥譜,其中41個菌株對9種以上的抗生素耐藥,此外,有7個菌株對所有抗生素耐藥;67株腸炎沙門氏菌共產(chǎn)生20種耐藥譜,有2株對9種以上的藥物耐藥,部分菌株形成較固定的耐藥譜,AMP-NA-TE、AMP-CFP-NA、AMP-CFP-NA-TE;14株德爾卑沙門氏菌產(chǎn)生13種耐藥譜,對四環(huán)素、萘啶酸、磺胺甲嗯唑和氯霉素的耐藥性較高,有2株對9種以上耐藥。對134株沙門氏菌進行11個耐藥基因的檢測,blaTEM-1-like、blaCTX-M、blaOXA-1-like、sull、aacC4、aac6-lb、floR、tet(G)檢出率分別 73.1%、37.3%、29.1%、34.3%、32.8%、32.1%、36.6%、24.6%;blaCMY-2、blaPSE及blaSHV均未檢出。對9種以上的藥物超級耐藥的印第安納沙門氏菌,對β-內酰胺酶基因blaOXA-1-like、blaCTX-M、blaTEM-1-like 及 floR、aadA2、sull 及 aac(6')-1b有較高攜帶率,這是其成為超級耐藥克隆的主要原因:腸炎沙門氏菌主要表現(xiàn)為對氨芐青霉素、萘啶酸、四環(huán)素、頭孢哌酮中等程度耐藥,且多數(shù)為多重耐藥,其blaTEM-1-like攜帶率最高。因此,控制并嚴格規(guī)范相關藥物在動物飼養(yǎng)過程中的應用,對阻止動物臨床及人類臨床多重耐藥細菌的產(chǎn)生有著重大的意義。
[Abstract]:Salmonella is an important pathogen of human and animal in the world. Animal derived food is the main source of Salmonella infection, and chicken and pig are the most important animal source food in China. Therefore, to understand the contamination situation of Salmonella in chicken, pig feeding process and food processing, to control the spread of Salmonella and reduce food safety. All hidden dangers are of great significance. In order to shorten the detection time and provide the basis for clinical diagnosis, the PCR method for rapid detection of Salmonella is optimized. The methods established to screen the collected clinical samples and the isolation and identification of Salmonella bacteria, the serological identification of Salmonella isolates and the resistance table are made. Type and genotype analysis and MLST molecular traceability study to clarify the internal relationship of Salmonella strains from different sources and provide the basis for the prevention and control of salmonellosis. First, the screening and optimization of Salmonella rapid detection method and optimization method based on the national standard 【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.61

【參考文獻】

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本文編號：2037553

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