本文關(guān)鍵詞： 副豬嗜血桿菌 基因缺失株 自然轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化頻率　出處：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：自然轉(zhuǎn)化可用于構(gòu)建副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)的基因缺失株,對于研究其毒力因子和致病機(jī)制有重要的意義。本研究采用控制變量法,對副豬嗜血桿菌自然轉(zhuǎn)化過程中的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。分別比較了點(diǎn)樣時細(xì)菌不同生長階段、點(diǎn)樣孵化不同時長、轉(zhuǎn)化體系細(xì)菌不同濃度、外源環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)不同濃度、外源質(zhì)粒不同濃度及轉(zhuǎn)化后平板孵化不同時間等條件下的自然轉(zhuǎn)化頻率。結(jié)果表明,副豬嗜血桿菌的平板轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)在細(xì)菌處于對數(shù)生長后期(OD600≈1.5~1.7)時點(diǎn)樣孵化,孵化時長為13 h,體系中外源質(zhì)粒的濃度大于0.1μg/μL,轉(zhuǎn)化后平板孵育5 h時,副豬嗜血桿菌自然轉(zhuǎn)化以較高頻率發(fā)生。本研究確定了副豬嗜血桿菌自然轉(zhuǎn)化過程中的最佳條件,為副豬嗜血桿菌毒力因子及致病機(jī)制等基因功能的相關(guān)研究提供了參考。
[Abstract]:Natural transformation can be used to construct the gene deletion strain of Haemophilus parasuis HPS. It is of great significance to study virulence factors and pathogenicity mechanism. Control variable method is used in this study. The experiment conditions of Haemophilus parasuis during natural transformation were optimized. Different growth stages of bacteria, different incubation time, different concentration of bacteria in transformation system were compared. Different concentrations of exogenous cyclic adenosine monophosphate were observed. The natural transformation frequency of exogenous plasmids in different concentrations and different incubation time after transformation was studied. The plate transformation test of Haemophilus parasuis incubated in the late stage of logarithmic growth, the incubation time was 13 hours. The concentration of exogenous plasmids in the system was greater than 0.1 渭 g / 渭 L and incubated with the plate for 5 h. The natural transformation of Haemophilus parasuis occurred at a higher frequency. In this study, the optimal conditions for the natural transformation of Haemophilus parasuis were determined. It provides a reference for the study of virulence factor and pathogenicity of Haemophilus parasuis.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院豬病研究中心;西南醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(No.201303034)
【分類號】：S852.612
【正文快照】： *同等貢獻(xiàn)作者Establishment and Condition Optimization for Natural TransformationMethod of Haemophilus parasuisJIN Jin1*DAI Ke1*WEN Xin-Tian1HE Lv-Qin1ZHANG Lu-Hua1,2ZHAO Yu-Jia1CAO San-Jie1HUANG Xiao-Bo1WU Rui1ZHAO Qin1WEN Yi-Ping1**1 Research Center of

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