本文關鍵詞：2015南昌市活禽市場禽流感病毒污染及從業(yè)人員細胞免疫狀況調(diào)查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:禽流感病毒的跨種傳播和不同亞型之間重組產(chǎn)生新的病毒株或新的亞型引起了全球廣泛的高度注意。2013年以前,國際上已報道了人感染H5N1、H7N7、H7N3、H7N2、H9N2、H10N7等禽流感病例,從2013年春季起,我國面臨頻發(fā)的人H7N9禽流感病例,同年12月國家衛(wèi)計委宣布在江西省南昌市確診了全球首例人感染H10N8禽流感病例。既往研究提示,活禽市場在禽流感病毒的保存、繁殖和傳播中起著至關重要的作用;是禽流感病毒基因混合池,為不同亞型禽流感病毒基因重組提供有利條件;是人感染禽流感病毒的主要源頭;也是預防和控制禽流感的關鍵所在。本研究的主要目的是通過細胞免疫學方法,探索活禽從業(yè)人群T淋巴細胞對不同流感病毒保守多肽(NP/M1)應答的頻率和強度;同時,對活禽市場及其從業(yè)人員開展現(xiàn)況調(diào)查,了解活禽從業(yè)人群個人衛(wèi)生防護行為和活禽市場禽流感病毒污染程度,以期為進一步采取公共衛(wèi)生行動提供科學依據(jù)。方法:(1)流行病學調(diào)查,通過二階段整群抽樣的方法抽取南昌市轄區(qū)內(nèi)76家活禽市場內(nèi)全部活禽從業(yè)人群作為調(diào)查對象。利用自制問卷收集活禽市場基本情況和管理措施實施情況以及活禽從業(yè)人員的人口統(tǒng)計學、職業(yè)暴露和衛(wèi)生習慣等信息。問卷調(diào)查結(jié)束后,采集活禽市場中的廢水、禽類新鮮糞便和籠具表面涂抹擦拭物三類具有代表性的環(huán)境標本,同時采集活禽從業(yè)人員EDTA-Na抗凝血20ml的血液標本。(2)實驗室檢測,環(huán)境標本在采集后1周內(nèi)使用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應法(RT-PCR)進行A型流感病毒核酸檢測,陽性標本再使用H5、H7、H9、H10特異性引物進行禽流感病毒亞型的鑒定;從業(yè)人員的血液標本采用酶聯(lián)免疫斑點檢測試驗(ELISPOT)進行禽流感病毒特異性細胞免疫應答反應的檢測。(3)數(shù)據(jù)分析,利用Epidate3.0創(chuàng)建數(shù)據(jù)庫并進行數(shù)據(jù)的錄入,應用spss13.0軟件包進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計方法采用描述性統(tǒng)計分析、卡方檢驗和方差分析,假設檢驗的顯著性水準設為0.05,P0.05認為有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:(1)調(diào)查的76家活禽市場中,55.26%(42/76)實施一日一清洗;76.32%(58/76)實行一周一消毒,僅2家禽類攤檔一月一休市;97.37%(74/76)的市場現(xiàn)場宰殺活禽,69.74%(53/76)存在活禽存欄過夜現(xiàn)象。(2)365名活禽從業(yè)人員累積職業(yè)暴露時間中位數(shù)是13年(四分位數(shù)間距:5~20年),主要暴露方式為宰殺(58.90%)和銷售(43.01%),90.96%的暴露頻率≥5d/周,13.97%報告近期接觸過病死禽。工作中堅持每天戴口罩、帶手套、每次接觸禽類后洗手、每次吃飯前洗手和每次洗手時使用肥皂或洗手液的分別占14.79%、20.00%、46.58%、52.05%和47.67%。(3)474份環(huán)境標本中,75份A型流感病毒核酸陽性(陽性率15.82%),其中禽流感病毒亞型H9陽性44份,H5陽性16份,H7陽性11份,H10陽性2份。三種環(huán)境標本均有A型流感病毒陽性檢出,陽性檢出率差異有統(tǒng)計學意義(?2=12.85,P=0.002),廢水陽性檢出率顯著高于其它標本。(4)365份活禽從業(yè)人員血液標本中,241份標本記性性T細胞對流感病毒NP/M1應答(應答陽性率66.03%)。其中104份標本的T細胞對H9亞型禽流感病毒NP/M1多肽應答,以對NP反應為主,應答頻率隨年齡的增長而降低,隨職業(yè)暴露時間的增加先升高后下降。結(jié)論:(1)南昌市活禽市場禽流感防控措施未得到充分落實,市場禽流感病毒污染程度較為嚴重,提示需要進一步加強市場防控措施實施力度,降低活禽從業(yè)人群和市場顧客的感染風險。(2)南昌市活禽從業(yè)人員疫苗接種率低,每周接觸活禽頻率高,累計接觸時間長且個人衛(wèi)生防護措施采用率較低,存在發(fā)生感染的隱患,公共衛(wèi)生工作者應加強對該人群的宣傳教育,提高其個人防護意識。(3)南昌市活禽從業(yè)人群對H9亞型禽流感病毒和季節(jié)性流感病毒存在交叉反應的記憶性T細胞免疫應答。年齡和職業(yè)暴露時間是T細胞對H9亞型禽流感病毒NP/M1肽段應答頻率的影響因素。
【關鍵詞】：活禽市場 禽流感 活禽從業(yè)人群 酶聯(lián)免疫斑點檢測試驗
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R511.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料與方法13-20
• 2.1 流行病學調(diào)查13-15
• 2.1.1 調(diào)查目的13
• 2.1.2 調(diào)查對象13
• 2.1.3 調(diào)查方法13-14
• 2.1.4 標本的采集與處理14
• 2.1.5 組織與實施14-15
• 2.2 RT-PCR實驗15-16
• 2.2.1 主要試劑15
• 2.2.2 主要儀器15
• 2.2.3 核酸抽提15-16
• 2.2.4 禽流感病毒核酸檢測16
• 2.3 ELISPOT實驗16-19
• 2.3.1 主要儀器16-17
• 2.3.2 主要試劑17
• 2.3.3 抗原肽庫的選擇17
• 2.3.4 PBMCs復蘇17-18
• 2.3.5 PBMCs流式細胞計數(shù)18
• 2.3.6 ELISPOT實驗18-19
• 2.4 統(tǒng)計分析19
• 2.5 質(zhì)量控制19-20
• 第3章 結(jié)果20-35
• 3.1 活禽市場基本情況20-22
• 3.1.1 活禽市場基本情況20-21
• 3.1.2 活禽市場中禽類攤檔情況21-22
• 3.2 活禽從業(yè)人群特征22-25
• 3.2.1 人口學特征22-23
• 3.2.2 活禽職業(yè)暴露情況23-24
• 3.2.3 個人衛(wèi)生行為24-25
• 3.3 活禽市場禽流感病毒污染狀況25-27
• 3.3.1 活禽市場禽流感病毒檢測情況25-26
• 3.3.2 不同類型標本禽流感病毒檢出情況26-27
• 3.4 ELISPOT實驗結(jié)果27-35
• 3.4.1 T細胞對不同亞型流感病毒NP/M1多肽的應答28-30
• 3.4.2 T細胞對流感病毒NP/M1多肽的交叉反應強度分析30
• 3.4.3 年齡與T細胞對禽流感病毒NP/M1多肽的應答的分析30-32
• 3.4.4 暴露時間與T細胞對禽流感病毒NP/M1多肽的應答分析32-34
• 3.4.5 環(huán)境污染與T細胞對禽流感病毒NP/M1多肽的應答分析34-35
• 第4章 討論35-39
• 4.1 活禽市場禽流感病毒污染及從業(yè)人員分析35-37
• 4.2 活禽從業(yè)人員對流感病毒MP/M1多肽的T細胞免疫研究37-39
• 第5章 結(jié)論與展望39-40
• 5.1 結(jié)論39
• 5.2 進一步工作方向39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻41-46
• 附錄A46-48
• 附錄B48-50
• 攻讀學位期間的研究成果50-51
• 綜述 職業(yè)人群高致病性禽流感的流行病學研究進展51-60
• 主要參考文獻57-60

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