目的:本研究擬通過廣泛篩選特異性引物探針組,建立一套乙型肝炎病毒（HBV）微小RNA-3（miR-3）的絕對定量PCR檢測方法。方法:基于莖環(huán)引物RT-qPCR方法原理,設(shè)計莖環(huán)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,結(jié)合SYBR Green法qPCR進(jìn)行特異性初篩,選擇特異性較佳的引物組,再結(jié)合TaqMan MBG探針,確定最佳的引物探針組,實現(xiàn)對HBV miR-3的定量檢測。結(jié)果:共設(shè)計和測試了25套莖環(huán)引物組,利用基于SYBR Green的RT-qPCR方法,篩選出6套具有良好特異性的引物組,并進(jìn)一步針對這些引物組設(shè)計和測試了相應(yīng)的探針,獲得了可精準(zhǔn)定量HBV miR-3的引物探針組。測試結(jié)果表明,該引物探針組不但保證了高特異性,而且定量線性范圍達(dá)到每個反應(yīng)102～108拷貝,其擴(kuò)增效率約為88%。結(jié)論:本研究確立了一套可用于絕對定量檢測HBV miR-3的特異性引物探針組。 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

HBV mi R-3特異性引物SYBR Green法篩選

HBV mi R-3特異性高靈敏引物探針組中的篩選

本研究對HBV陽性的Hep3B細(xì)胞和HBV陰性的Hep G2細(xì)胞提取的mi RNA進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖4所示，C5和C7兩套引物Hep3B細(xì)胞中HBV mi R-3的Ct值接近40，可認(rèn)為未檢出。C18、KEY、T3和T5均能檢測出Hep3B細(xì)胞中的HBV mi R-3,Ct值最低為27（在T3中），最高為31（在C18中），且陰性對照RT-free均無擴(kuò)增。在陽性對照能被順利檢測出的幾套引物中，對于Hep G2細(xì)胞樣品，在C18中未檢出，在其余幾套中有非特異檢出，其中KEY引物探針組在Hep G2細(xì)胞中的Ct值約為37，在Hep3B細(xì)胞中的Ct值約為29，仍然表現(xiàn)出良好的特異性和敏感性。討論


本文編號：3114509