目的研究NLRP3對(duì)小鼠脾細(xì)胞淋球菌感染模型中Th17/Treg平衡的調(diào)節(jié)作用。方法體外分離、培養(yǎng)小鼠脾細(xì)胞后,分為如下4組:空白對(duì)照組、NLRP3拮抗劑（MCC950）組、淋球菌感染組、淋球菌+MCC950組。培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞,采用細(xì)胞內(nèi)染色流式細(xì)胞術(shù)檢測Th17/Treg細(xì)胞比例,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測NLRP3、Th17/Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)水平,Western blot檢測NLRP3、RORγt、Foxp3蛋白表達(dá)。ELISA法檢測脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中Th17/Treg相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、TGF-β、IL-10水平。結(jié)果脾細(xì)胞在淋球菌的刺激下,Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞比例增多,細(xì)胞內(nèi)NLRP3、Th17/Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3 mRNA和蛋白表達(dá)水平升高,細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-17、TGF-β、IL-10含量增高（P<0.01）;加入MCC950預(yù)處理后,Th17細(xì)胞比例、細(xì)胞內(nèi)NLRP3、RORγt mRNA和蛋白表達(dá)、細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-17含量明顯降低,Treg細(xì)胞比例、細(xì)胞內(nèi)Foxp3 mRNA... 

【文章來源】：中國皮膚性病學(xué)雜志. 2020,34(10)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

脾細(xì)胞中Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞比例

Western blot結(jié)果顯示,NLRP3、RORγt、Foxp3蛋白各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=136.29,138.18,126.37,F0.01=4.57;P均<0.01)。淋球菌刺激小鼠脾細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)NLRP3、RORγt、Foxp3蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯增加,分別為對(duì)照組的5.57倍(t=11.40,t0.01=2.98;P<0.01)、5.84倍(t=12.57,t0.01=2.98;P<0.01)和2.79(t=8.84,t0.01=2.98;P<0.01)倍。加入NLRP3拮抗劑(MCC950)預(yù)處理后,細(xì)胞內(nèi)NLRP3、RORγt蛋白表達(dá)水平明顯降低,細(xì)胞內(nèi)Foxp3蛋白表達(dá)水平明顯增高,與淋球菌感染組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.17,9.74,13.53,t0.01=2.98,P均<0.01),見圖3～4。圖3 細(xì)胞內(nèi)NLRP3、RORγt、Foxp3蛋白免疫印跡結(jié)果

細(xì)胞內(nèi)NLRP3、RORγt、Foxp3蛋白免疫印跡結(jié)果


本文編號(hào)：3114188