【摘要】：【目的】系統(tǒng)評估結(jié)核患者和健康人群的免疫功能�！痉椒ā渴占�23例健康志愿者和38例結(jié)核患者的新鮮外周血,通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(PBMCs)。流式細胞術(shù)評估細胞活化分子、抑制性分子和細胞功能。電化學發(fā)光法檢測血清中IFN-γ、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α濃度�！窘Y(jié)果】結(jié)核患者體內(nèi)IFN-γ、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α分泌均顯著高于健康對照。結(jié)核患者效應(yīng)細胞功能總體呈現(xiàn)減弱趨勢,包括CD4+、CD8+、NK、DC、Mon。然而,調(diào)節(jié)T細胞(Tregs)以及結(jié)核特異性的CD4+、CD8+和NK細胞功能顯著增強。CTLA-4、TIM-3、TIGIT、PD-1在結(jié)核患者CD4+、CD8+、NK和Tregs表達顯著高于健康志愿者�！窘Y(jié)論】結(jié)核患者免疫功能變化涉及多種炎癥因子、細胞和分子,呈異質(zhì)性。結(jié)核患者細胞功能失衡,效應(yīng)細胞功能明顯減弱,抑制性細胞功能增強。【目的】研究TIGIT如何影響活動性結(jié)核中調(diào)節(jié)性T和效應(yīng)T細胞的作用及機制�！痉椒ā考{入85例健康志愿者和52例結(jié)核患者,使用流式細胞儀檢測TIGIT的表達與Tregs和CD4+效應(yīng)細胞(Teffs)細胞活化、增殖的關(guān)系。使用TIGIT Fc融合蛋白或CD155融合蛋白或?qū)φ誌g G與結(jié)核患者PBMCs共同孵育,觀察封閉或激活TIGIT信號通路后對Tregs和Teffs細胞活化、分泌細胞因子的能力及增殖功能的影響。最后,阻斷CD4+T細胞的TIGIT信號通路,觀察巨噬細胞控制Mtb生長的能力【結(jié)果】結(jié)核患者TIGIT在Tregs上高表達且與Tregs的活化和功能正相關(guān)。單獨阻斷TIGIT信號通路可以降低Tregs的功能,包括IL-10的分泌和增殖功能,而對Teffs功能沒有作用。盡管阻斷TIGIT對Teffs沒有影響,封閉TIM-3信號通路可以恢復(fù)Teffs功能。此外,阻斷CD4+T細胞的TIGIT途徑增強了巨噬細胞控制Mtb生長的能力�！窘Y(jié)論】CD4+T細胞上表達的TIGIT很可能主要通過Tregs而不是Teffs在結(jié)核感染中發(fā)揮作用�！灸康摹垦芯恳种菩苑肿訉-SPOT結(jié)果的影響�！痉椒ā考{入32例健康志愿者、24例結(jié)核T-SPOT高反應(yīng)(TBAg/PHA≥0.3)和20例結(jié)核T-SPOT假陰性/低值(TBAg/PHA0.3)患者,收集新鮮外周血,使用流式細胞儀檢測CD4+、CD8+和NK細胞功能和TIM-3、PD-1的表達。在結(jié)核T-SPOT假陰性/低值PBMCs中加入TIM-3和PD-1封閉抗體共同孵育,觀察封閉信號通路后對T-SPOT結(jié)果的影響�！窘Y(jié)果】結(jié)核患者非特異性CD4+、CD8+和NK細胞功能均顯著低于健康對照,T-SPOT高反應(yīng)患者與T-SPOT低反應(yīng)患者無差別。然而,T-SPOT高反應(yīng)患者結(jié)核特異性CD4+、CD8+和NK細胞功能強于T-SPOT假陰性/低值患者。T-SPOT假陰性/低值組CD8+PD-1+、NK PD-1+和NK TIM-3+的表達顯著高于T-SPOT高反應(yīng)性患者。聯(lián)合封閉TIM-3和PD-1信號通路均可部分提高IFN-γ分泌水平和T-SPOT斑點計數(shù)�！窘Y(jié)論】TIM-3和PD-1的過表達可導(dǎo)致T-SPOT假陰性/低值,封閉TIM-3和PD-1信號通路可以部分糾正T-SPOT假陰性和低比值,提高T-SPOT準確性。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R52
【圖文】：

數(shù)據(jù)分析和作圖使用GraphPad軟件，兩組間的比較采用Mann Whitney U檢驗。P< 0.05 具有統(tǒng)計學差異（*P < 0.05)。結(jié) 果1. 納入研究對象的基本特征本部分納入 61 例研究者，包括 23 例健康對照和 38 例結(jié)核患者。研究對象的平均年齡分別為：健康對照 38.6 歲（23-63），結(jié)核組 51.0 歲（18-78）。健康組男性占比為 69.5%，結(jié)核組男性占比 65.7%。 結(jié)核組包括 29 例肺結(jié)核患者和 9 例肺外結(jié)核患者，肺外結(jié)核包括腸結(jié)核、腎結(jié)核、肝臟結(jié)核和結(jié)核性腹膜炎。2. 結(jié)核患者炎癥因子水平顯著高于健康對照為了評價結(jié)核患者體內(nèi)炎癥水平的改變，血清中的 10 種炎癥因子用于檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)核患者體內(nèi) TNF- 、IL-8、IL-6、IL-1β、IL-12p70、IL-4、IL-2、IL-13、IL-10、IFN-γ 濃度均顯著高于健康對照，說明結(jié)核活動時機體呈現(xiàn)免疫激活的狀態(tài)。

+和 NK 細胞分泌 IFN-γ、IL-2和TNF- 能力顯現(xiàn)不同程度的下降（圖2.a）。NK細胞表面CD107a表達顯著減少，表明NK細胞脫顆粒能力降低（圖2.b）。此外，結(jié)核患者Mon和DC細胞分泌TNF-能力明顯減弱（圖 2.c）。然而，具有抑制性功能的 Tregs 細胞分泌 IL-10 的能力增強，說明結(jié)核患者 Tregs 分泌功能增強（圖 2.d）。圖 2.結(jié)核患者非特異性免疫功能評估。從 ATB（n=23）和 HC（n=20）中收集外周血細胞，流式細胞術(shù)檢測不同免疫細胞的功能。（a）IFN-γ、TNF- 、IL-2、IFN-γ+TNF-+、IFN-γ+IL-2+和 IL-2+TNF-+在 CD4+、CD8+和 NK 細胞上的表達水平（LeukoAct Cktl With GolgiPlug 刺激）。（b）CD107a 在 CD8+和 NK 細胞上的表達（LeukoAct Cktl With GolgiPlug 刺激）。（c）TNF-在 DC 和單核細胞（Mon）上的表達水平（LPS 刺激）（。d）Tregs 分泌 IL-10 的百分比（aCD3/CD28刺激）。結(jié)果表示為 mean±SD。* P <0.05，均代表結(jié)核組與對照組比較（Mann-Whitney U-檢驗）。4. 結(jié)核患者的結(jié)核特異性細胞活化增強且功能增強我們進一步檢測結(jié)核特異性的細胞功能，結(jié)果表明結(jié)核特異性的 CD4+、CD8+和 NK 細胞活性顯著增強（圖 3.a）。此外

圖 3. 結(jié)核患者的細胞活化和結(jié)核特異性細胞功能。從 ATB（n=23）和 HC（n=20）中收周血單個核細胞，流式細胞術(shù)檢測（a）HLA-DR 在 CD4+、CD8+和 NK 細胞上的表達百（ESAT-6/CFP-10 刺激）。（b）IFN-γ 在 CD4+、CD8+和 NK 細胞上的表達百分比（ESAT-6/CF刺激）。結(jié)果表示為 mean±SD。* P <0.05，均代表結(jié)核組與對照組比較（Mann-Whitney U驗）。5. 結(jié)核患者抑制性分子在不同細胞上表達升高為研究抑制性分子在結(jié)核中的作用，該研究還檢測了 CTLA-4、TIM-3、TIGPD-1 在不同細胞上的表達。結(jié)核患者 CTLA-4 在 CD4+、CD8+和 NK 細胞表達分比均顯著高于健康對照（圖 4.a）。TIM-3 在 CD4+、CD8+、NK 細胞和 Treg的表達顯著增強（圖 4.b）。結(jié)核患者 TIGIT 在 CD4+和 Tregs 表達百分比均明顯于健康對照（圖 4.c）。PD-1 在 CD4+、CD8+、NK 細胞和 Tregs 的表達均顯著升（圖 4.d）。以上說明，在結(jié)核患者中抑制性分子均在不同細胞水平上上調(diào)，暗

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1 徐玲玲;葉紅;;維持性血液透析患者合并活動性結(jié)核的單中心臨床分析[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2017年03期

2 劉國成,謝穎光;1TuPPD強陽性對活動性結(jié)核的判斷觀察[J];臨床薈萃;1998年21期

3 賈剛田;普通病房住院患者活動性結(jié)核的研究[J];國外醫(yī)學(醫(yī)院管理分冊);1992年01期

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本文編號：2761908