【摘要】：背景:白念珠菌是人類真菌感染中最突出的真菌病原體,其致病率日漸升高而目前抗真菌治療手段卻不盡人意。因此有必要進(jìn)一步研究白念珠菌的致病機(jī)制,尋找新的藥物作用靶點(diǎn)。課題組首次報(bào)道SPT20基因是白念珠菌重要的毒力基因,其可通過(guò)多種途徑調(diào)控白念珠菌的活力與毒力。目前罕有對(duì)白念珠菌SPT20的研究,其毒力對(duì)應(yīng)的分子機(jī)制尚不清楚。但已有報(bào)道抗氧化損傷能力是白念珠菌毒力的重要體現(xiàn),因此有必要評(píng)估SPT20基因在白念珠菌抗氧化損傷機(jī)制中的作用。目的:本研究擬通過(guò)基因、蛋白水平探討SPT20基因在白念珠菌抗氧化損傷系統(tǒng)中的作用,進(jìn)一步揭示其發(fā)揮作用的潛在分子機(jī)制。方法:我們?cè)诤蠬202的YPD培養(yǎng)板上觀察了白念珠菌野生株,SPT20缺失株和SPT20回復(fù)株的生長(zhǎng)情況。然后利用DCFH-DA檢測(cè)了有/無(wú)H202刺激下白念珠菌細(xì)胞內(nèi)ROS的水平,并用試劑盒評(píng)估關(guān)鍵抗氧化酶的活性以及不同菌株細(xì)胞內(nèi)[GSH/GSSG]比率。此外,通過(guò)RT-PCR評(píng)估白念珠菌STP20缺失株中氧化應(yīng)答關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄情況,并且使用蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)闡明Hogl的磷酸化水平。結(jié)果:連續(xù)梯度稀釋試驗(yàn)提示,SPT20的缺失導(dǎo)致白念珠菌對(duì)外源性氧化劑H202的敏感性升高。與野生型菌株相比,SPT20缺失株菌體內(nèi)ROS水平明顯升高,而對(duì)清除ROS有關(guān)鍵作用的CAT活性明顯降低。同時(shí),體現(xiàn)白念珠菌氧化應(yīng)激壓力[GSH]/[GSSG]比率明顯升高,SPT20缺失株面臨更高的氧化損傷壓力。RT-PCR結(jié)果顯示,SPT20的缺失導(dǎo)致氧化應(yīng)答相關(guān)基因(包括CAT1,和GLR1)的表達(dá)水平發(fā)生變化,且與上述結(jié)果相符合。蛋白質(zhì)印跡分析進(jìn)一步顯示,SPT20的缺失顯著增強(qiáng)了Hog1的磷酸化水平,說(shuō)明其對(duì)白念珠菌調(diào)控氧化應(yīng)答關(guān)鍵通路(Hog1-MAPK通路)產(chǎn)生了重要影響。結(jié)論:SPT20基因在白念珠菌氧化應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,其對(duì)白念珠菌抗氧化酶系統(tǒng)、谷胱甘肽系統(tǒng)發(fā)揮正常功能是必需的,并且可能參與氧化應(yīng)答相關(guān)通路的過(guò)程,為臨床抗真菌治療提供了潛在的靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R519.3
【圖文】：

通過(guò)連續(xù)稀釋點(diǎn)板的方法，將白念珠菌、缺失株、？ＳＰＤＯ回復(fù)株在含不同逡逑濃度Ｈ２０２邋ＹＰＤ培養(yǎng)板上生長(zhǎng)，３０°Ｃ培養(yǎng)４８ｈ后，觀察菌株的生長(zhǎng)情況，實(shí)驗(yàn)逡逑結(jié)果如圖３－１所示。逡逑１０＊邋１０：邋１０２邋１０１邋１０邋‘邋１０３邋１０２邋１０１邋１０４邋１０３邋１０２邋１０１邋１０４邋１０３邋１０２邋１０１邋１０‘邋１０３邋１０２邋１０１逡逑ｓｐｔ２０Ａ／Ａ逡逑３ｔｐ２0Ａ／ＳＰＴ２０邐ｊ逡逑ＹＰＤ邐２ｍＭ邋１＾０２邐４ｍＭ邋Ｈ２0２邐６ｍＭ邋Ｈ２0２邐８ｍＭ邋明逡逑圖３－１邋５７Ｔ２０基因缺失后白念珠菌對(duì)Ｈ２０２敏感性增高，且隨Ｈ２（）２濃度增加而增高。ＳＰ７７０逡逑基因的引入可逆轉(zhuǎn)白念珠菌對(duì)ｈ２ｏ２的高敏感性。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ．邋３－１邋Ｄｅｌｅｔｉｏｎ邋0＼＇ＳＰＴ２０邋ｇｅｎｅ邋ｌｅａｄｓ邋ｔｏ邋ｉｎｃｒｅａｓｅｄ邋ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ邋ｏｆ邋Ｃａｎｄｉｄａ邋ａｌｂｉｃａｎｓ邋ｔｏ邋Ｈ２0２－逡逑Ｔｈｅ邋ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｏｉ＇邋ＳＰＴ２０邋ｇｅｎｅ邋ｃａｎ邋ｒｅｖｅｒｓｅ邋ｔｈｅ邋ｈｉｇｈ邋ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ邋ｏｆ邋Ｃａｎｄｉｄａ邋ａｌｂｉｃａｎｓ邋ｔｏ邋Ｈ２0２－逡逑由連續(xù)稀釋點(diǎn)板試驗(yàn)結(jié)果可以看到，缺失]株／ｌ：邋ＹＰＤ培養(yǎng)板上１ｄ現(xiàn)逡逑與白念珠南野生株類似的生長(zhǎng)狀況，可知敲除后＋會(huì)影響白念珠菌生長(zhǎng)逡逑狀況ｕ邋ｌ〖ｌＭ丨對(duì)環(huán)境屮Ｈ２０２壓力T，缺失株的抵抗能力相比野生株明顯減逡逑弱，回復(fù)ＳＰ：Ｔ２（；基因后T逆轉(zhuǎn)這種情況。說(shuō)明缺失基因的白念珠菌對(duì)Ｈ２０２逡逑的敏感性明顯增高，其抗氧化損傷能力明顯減弱。逡逑３．２邋５７７＾基因缺失株細(xì)胞內(nèi)ＲＯＳ含量明顯上升逡逑作為自由基產(chǎn)生物

ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ＳＰＴ２０邋ｄｅｌｅｔｉｏｎ邋ｓｔｒａｉｎ邋ｗａｓ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．逡逑我們通過(guò)檢測(cè)刺激組（６ｍＭ邋Ｈ２０２）和非刺激組４８小時(shí)內(nèi)細(xì)胞中熒光強(qiáng)度逡逑的變化情況，比較了不同菌株細(xì)胞內(nèi)ＲＯＳ積累情況。結(jié)果如圖３－２所示。結(jié)果逡逑３４逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙曉霞;馮文莉;;白念珠菌黏附基因的研究進(jìn)展[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2018年05期

2 祝欣;馮文莉;;白念珠菌三穩(wěn)態(tài)轉(zhuǎn)換系統(tǒng)及相關(guān)因素的研究進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2016年24期

3 董懷懷;王元花;廖澤彬;姜遠(yuǎn)英;曹穎瑛;;芒果苷協(xié)同氟康唑抗耐藥白念珠菌作用研究[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2017年02期

4 廉翠紅,劉維達(dá);與白念珠菌黏附和侵入相關(guān)的毒力因子研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè);2004年05期

5 李洪霞;巢式RT-PCR檢測(cè)福爾馬林固定、石蠟包埋的小鼠組織中白念珠菌mRNA[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè);2003年06期

6 劉為國(guó);黃敏;;白念珠菌粘附上皮細(xì)胞的機(jī)制[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2002年02期

7 趙敬軍;;白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究近況[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2000年02期

8 秦振宇;延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間氟康唑?qū)Π啄钪榫盍Φ挠绊慬J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(皮膚性病學(xué)分冊(cè));1999年01期

9 李岷;編碼白念珠菌細(xì)胞表面蛋白的cDNA克隆[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè);1996年02期

10 侯幼紅，吳紹熙;氟康唑抑制白念珠菌粘附的研究[J];云南醫(yī)藥;1995年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 黃廣華;;白念珠菌形態(tài)轉(zhuǎn)換及宿主環(huán)境適應(yīng)的遺傳調(diào)控機(jī)制[A];第十一次全國(guó)基因功能與表觀遺傳調(diào)控學(xué)術(shù)研討會(huì)摘要集[C];2015年

2 ;線粒體功能在不同環(huán)境對(duì)白念珠菌生存及代謝的影響[A];2012年中國(guó)菌物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)會(huì)議摘要[C];2012年

3 滿旭;王惠平;;白念珠菌轉(zhuǎn)錄因子編碼基因表達(dá)與氟康唑耐藥的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

4 曾躍斌;;白念珠菌全基因組表達(dá)譜芯片在抗真菌藥物研究中的應(yīng)用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)化療藥理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

5 周萬(wàn)青;沈瀚;張之烽;張葵;;白念珠菌臨床分離調(diào)查及基因分型研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

6 閻瀾;李妙海;曹永兵;高平揮;王彥;姜遠(yuǎn)英;;白念珠菌耐藥新蛋白——交替氧化酶[A];藥學(xué)發(fā)展前沿論壇及藥理學(xué)博士論壇論文集[C];2008年

7 郭仁勇;;白念珠菌聚苯乙烯黏附增強(qiáng)基因1的研究進(jìn)展[A];2008年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

8 王瓊;史冬梅;劉維達(dá);;小鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)白念珠菌吞噬、殺傷作用的研究[A];2016全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2016年

9 佘曉東;高盈;張莉莉;沈永年;Li Dongmei;劉維達(dá);;白念珠菌線粒體功能缺陷對(duì)胞壁結(jié)構(gòu)及毒力的影響研究[A];2015全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2015年

10 景偉芳;王惠平;;白念珠菌對(duì)唑類藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 國(guó)虹 雨凈;微生物的是是非非[N];中國(guó)教育報(bào);2001年

2 健康時(shí)報(bào)實(shí)習(xí)記者　 梁璐;瘙癢部位不同用藥有別[N];健康時(shí)報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 魏婷婷;miR-155在樹(shù)突狀細(xì)胞抗白念珠菌固有免疫應(yīng)答中的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

2 蔡瞻;協(xié)同氟康唑抗耐藥白念珠菌的小分子化合物設(shè)計(jì)、合成、生物活性和作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

3 呂權(quán)真;白念珠菌ORF19.273和FLO8基因在耐藥與宿主免疫中的功能和機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

4 段志敏;念珠菌影響巨噬細(xì)胞固有免疫反應(yīng)及自噬的效應(yīng)與機(jī)制的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

5 管秀好;白念珠菌刺激角質(zhì)形成細(xì)胞上清液對(duì)巨噬細(xì)胞免疫功能的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2018年

6 徐慧慧;白念珠菌中與鈣離子敏感性相關(guān)基因的鑒定和功能研究[D];江南大學(xué);2018年

7 曹永兵;轉(zhuǎn)錄因子Caplp促進(jìn)白念珠菌抗藥性形成的分子機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 吳建華;白念珠菌細(xì)胞周期及抗真菌中藥單體對(duì)其影響的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

9 徐錚;白念珠菌基因芯片的制備和應(yīng)用及兩個(gè)新基因的克隆和功能鑒定[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 曹穎瑛;白念珠菌生物被膜形成相關(guān)基因的功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王曼曼;白念珠菌orf19.1034功能的研究[D];淮北師范大學(xué);2019年

2 趙曉霞;白念珠菌SAP2、ERG11與唑類藥物耐藥關(guān)系的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

3 王佳佳;白念珠菌唑類藥物交叉耐藥與轉(zhuǎn)錄因子GCN4的相關(guān)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

4 林少明;SPT20基因在白念珠菌抗氧化損傷機(jī)制中的功能研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

5 郝雨o

本文編號(hào)：2716298