發(fā)布時間：2017-11-12 00:24

  本文關鍵詞：SAMHD1抗乙肝病毒作用及IFN-α調控SAMHD1表達的機制研究

  更多相關文章： SAMHD1 HBV IFN-α 肝細胞 ISGF3

【摘要】：研究背景及目的SAMHD1(the sterile alpha motif and HD domain containing protein-1)2011年被發(fā)現(xiàn)是一個新的固有免疫抗病毒分子。SAMHD1通過降解宿主細胞內d NTPs至低水平使逆轉錄病毒c DNA不能合成進而抑制病毒復制。研究表明SAMHD1可以抑制逆轉錄病毒、DNA病毒的復制和內源性逆轉錄因子的逆轉錄轉座。而Ⅱ型艾滋病病毒(HIV-2)和猴免疫缺陷病毒(SIVsm/mac)輔助基因編碼的Vpx蛋白則能拮抗SAMHD1對病毒復制的抑制作用。乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是全球性的公共健康問題。我們國家是乙肝病毒感染高度流行的國家。乙肝病毒的生命周期過程中有一個與慢病毒類似的逆轉錄過程,然而SAMHD1是否可以在肝細胞中通過降解d NTPs來抑制HBV的復制尚不清楚。干擾素(Interferon,IFN)作為乙肝治療中一種常用的抗病毒藥物,可以誘導許多抗病毒蛋白表達從而抑制病毒的復制。IFN-α可以通過經典途徑和非經典途徑誘導基因表達。經典IFN-α信號通路通過干擾素刺激基因因子3(ISGF3)誘導基因表達。ISGF3包括STAT1、STAT2和IRF9。非經典信號通路是STAT1非依賴的。至今,IFN-α在肝細胞中調控SAMHD1表達的機制尚不明確。本研究將探討SAMHD1對HBV復制的影響及IFN-α以何種途徑誘導肝細胞中SAMHD1表達。方法選取肝細胞系Hep G2、LO2、BEL-7402和SMMC-7721,使用Western Blot檢測SAMHD1內源性表達水平,并用免疫熒光法驗證。選擇兩株低表達SAMHD1的肝細胞BEL-7402和SMMC-7721,分別轉染p SAMHD1wt和p SAMHD1HD/AA,MTT檢測細胞的活性率。p HBVwt分別與p SAMHD1wt或p SAMHD1HD/AA瞬時轉染入SMMC-7721和BEL-7402細胞,Western Blot檢測SAMHD1外源性表達情況。p HBVwt,p RL-TK分別與p SAMHD1wt或p SAMHD1 HD/AA共轉染SMMC-7721和BEL-7402細胞,48 h后,ELISA檢測細胞上清HBs Ag、HBe Ag含量,q RT-PCR檢測HBV核心相關DNA的水平。Hep G2細胞轉染p HBVwt和p HBV△X質粒,Western Blot檢測SAMHD1蛋白表達水平。選取SMMC-7721和BEL-7402細胞,IFN-α以不同劑量和時間點處理肝細胞后,Western Blot和q RT-PCR檢測SAMHD1表達改變情況。選取IFN-α誘導的SMMC-7721細胞,分別轉染STAT1、STAT2和IRF9 si RNA下調相應基因表達后,再用IFN-α刺激,Western Blot和q RT-PCR檢測IFN-α誘導SAMHD1表達是否受到抑制。結果在四株肝細胞系Hep G2、LO2、BEL-7402和SMMC-7721中,檢測到SAMHD1均有內源性表達;SAMHD1的外源性表達對肝細胞系無細胞毒作用;肝細胞SMMC-7721、BEL-7402中SAMHD1可以抑制HBV的復制;Hep G2細胞中HBV復制可以下調SAMHD1表達;在肝細胞SMMC-7721、BEL-7402中IFN-α以時間和劑量依賴的方式上調SAMHD1蛋白表達水平;IFN-α處理的SMMC-7721細胞以時間依賴的方式在m RNA水平上調SAMHD1表達;分別用特異性si RNAs下調STAT1、STAT2和IRF9基因表達后,SMMC-7721細胞中再加入IFN-α刺激10 h,IFN-α誘導的SAMHD1表達水平下降。結論1.SAMHD1在肝細胞內可以抑制HBV復制;2.IFN-α在肝細胞中可以誘導SAMHD1表達;3.IFN-α在SMMC-7721中通過ISGF3復合體誘導SAMHD1表達。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R512.62

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本文編號：1173553