本文關鍵詞：小鼠睪丸糖基化蛋白質組學研究

  更多相關文章： 小鼠睪丸 蛋白質組學 N端糖基化 糖基化蛋白質譜 質譜

【摘要】：N-糖基化是生物體內最重要和最普遍的修飾方式之一,參與多種生物進程包括蛋白質折疊、蛋白質定位。很多證據(jù)表明糖基化在精子發(fā)生以及受精過程中起到重要作用,但我們對糖基化修飾蛋白的組成和生物結構知道的很少。睪丸作為一個重要的生殖內分泌器官,主要產(chǎn)生精子和分泌雄激素。睪丸結構復雜以及其在男性生殖系統(tǒng)中的重要作用都表明了其在研究男性生育方面至關重要的影響力。而在另一方面,蛋白質組學技術廣泛地應用于組織和細胞水平整體蛋白質的定性和定量研究；而近年來馬普實驗室利用凝集素來富集糖基化蛋白后,再使用質譜進行鑒定,同時利用重水環(huán)境對糖肽段進行凝集素酶切,使蛋白質組學能夠用于系統(tǒng)而全面地解析樣本中糖蛋白的具體修飾位點。目前,尚未有小鼠睪丸組織糖基化修飾譜系報道,因此本實驗主要通過結合液相色譜-串聯(lián)質譜蛋白質組學技術和糖肽富集技術構建小鼠睪丸N-糖基化蛋白質譜系,共鑒定到了1463個糖基化位點,分布于740種N-糖基化蛋白質。我們通過生物信息學方法系統(tǒng)闡釋這些修飾位點的序列特征、對應修飾蛋白主要參與的功能和調控通路。我們發(fā)現(xiàn)除鑒定的NXS和NXT基序外,在睪丸中最為富集的基序為NCX。GO和KEGG功能富集分析揭示了這些蛋白主要定位在細胞膜、溶酶體和高爾基體等部位,具有水解酶和肽酶等活性,主要參與細胞黏附、蛋白質水解和定位等事件。最后,我們進一步挑選了部分非分泌型的睪丸特異性的糖基化蛋白進行詳細分析,構建了復雜交互作用和基因功能調控網(wǎng)絡,發(fā)現(xiàn)這些糖蛋白與精子發(fā)生等過程密切相關。本實驗為研究糖蛋白在精子發(fā)生過程中作用的分子機制研究提供了理論基礎和備選分子靶標。
【關鍵詞】：小鼠睪丸 蛋白質組學 N端糖基化 糖基化蛋白質譜 質譜
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R321
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-11
• 材料與方法11-19
• 一、實驗材料11-13
• 二、實驗方法13-19
• 實驗結果19-29
• 一、小鼠睪丸蛋白糖基化位點的鑒定19-21
• 二、小鼠睪丸N-糖基化位點序列特征分析21-22
• 三、小鼠睪丸N-糖基化蛋白質功能富集分析22-24
• 四、小鼠睪丸N-糖基化蛋白質生物通路分析24-26
• 五、睪丸特異糖基化蛋白功能分析26-29
• 討論29-39
• 參考文獻39-46
• 文獻綜述46-60
• 參考文獻54-60
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況60-61
• 致謝61

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1 吳艷;吳士良;;糖基化與N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶家族[J];江蘇大學學報(醫(yī)學版);2006年03期

2 王炳花;王志玉;;漢坦病毒包膜糖蛋白糖基化位點突變體的構建[J];徐州醫(yī)學院學報;2009年06期

3 艾智武;由N-連接的過度糖基化缺陷型酵母表達的重組乙型肝炎疫苗的鑒定和評價[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;1995年02期

4 郝勤，張欣平，顧銀良，宋后燕，，朱運松;PAI－1糖基化位點突變體的構建及其在哺乳動物細胞中表達[J];上海醫(yī)科大學學報;1996年03期

5 韋薇;項金忠;羅建輝;;真核細胞表達重組蛋白糖基化研究與評價[J];中國新藥雜志;2014年15期

6 李東林;雷迎峰;;病毒蛋白糖基化研究進展[J];微生物學免疫學進展;2013年04期

7 宋鋼,官孝群,宋后燕;人組織型纖溶酶原激活劑cDNA糖基化位點突變體的構建[J];上海醫(yī)科大學學報;1998年06期

8 于瀾;張亮;張蕾;王芳;劉梓諭;程林峰;薛添;吳興安;徐志凱;張芳琳;;漢灘病毒包膜糖蛋白糖基化位點突變體重組假病毒的構建及初步鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2013年30期

9 程湘;CD44分子的結構特征[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);1998年04期

10 支艷艷;唱韶紅;鞏新;宋西勇;吳軍;劉波;;Endo-H在畢赤酵母中的表達、純化及其在N-糖基化分析中的應用[J];軍事醫(yī)學;2014年03期

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1 萬崎;馮勇;章曉聯(lián);陳新文;吳建國;;丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化位點突變體的研究[A];湖北省暨武漢市免疫學會第八屆學術會議論文集[C];2003年

2 張金輝;竇穎;佘薇薇;趙耀;劉平;趙曉東;;人類偏肺病毒F蛋白糖基化位點對其體內外復制能力的影響[A];中華醫(yī)學會第十五次全國兒科學術大會論文匯編（上冊）[C];2010年

3 張偉;陳瑤涵;楊們原;;糖修飾蛋白質組的標記和分離[A];全國生物醫(yī)藥色譜及相關技術學術交流會（2012）會議手冊[C];2012年

4 劉歡歡;周艷君;姜一峰;張善瑞;李國新;童光志;;PRRSV GP3N-糖基化作用的初步研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術研討會論文集[C];2010年

5 余春梅;李榮培;鄒慶;陳昕;劉平;趙曉東;;SCID小鼠糖基化位點突變的人偏肺病毒感染特點[A];中華醫(yī)學會第十五次全國兒科學術大會論文匯編（上冊）[C];2010年

6 萬崎;章晚聯(lián);陳新文;;丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化突變體的研究[A];中國蛋白質組學首屆學術大會論文摘要集[C];2003年

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1 劉銘琪;基于質譜的高通量糖基化肽段鑒定新方法研究[D];復旦大學;2013年

2 徐明杰;戊型肝炎病毒ORF2編碼蛋白N562糖基化及其突變的生物學效應[D];東南大學;2014年

3 楊楠;基于質譜技術對免疫球蛋白N-糖基化定量分析方法建立與應用[D];第二軍醫(yī)大學;2016年

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5 陳瑤函;基于生物質譜的糖蛋白組學新技術新方法研究[D];復旦大學;2011年

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7 王潭;鈣調磷酸酶調節(jié)因子1通過增強內質網(wǎng)中的N端糖基化上調β淀粉樣蛋白的生成[D];山東大學;2014年

8 楊波;重組非糖基化尿激酶型纖溶酶原激活劑的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2005年

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1 李富義;人類蛋白質糖基化位點預測的數(shù)據(jù)挖掘技術研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

2 宋培培;親水磁性富集材料的制備及其在糖基化蛋白質組學中的應用[D];新疆大學;2016年

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10 劉澤;串聯(lián)~（18）O同位素標記應用于定量糖蛋白質組研究[D];復旦大學;2009年

本文編號：713659