發(fā)布時間：2017-08-06 13:01

  本文關(guān)鍵詞：非基因整合建立人誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞方法的優(yōu)化研究

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【摘要】：誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞(iPSC)技術(shù)具有臨床應(yīng)用前景,但iPSC的遺傳穩(wěn)定性和成瘤性阻礙了其可能的臨床應(yīng)用。非整合質(zhì)粒(Episomal)方法無外源基因整合到宿主基因組上并且方法簡單,適宜推廣,是目前保證iPSC遺傳安全性的最佳方案之一,但其誘導(dǎo)效率偏低,嚴(yán)重阻礙了其應(yīng)用。本研究旨在優(yōu)化Episomal方法,將臍血單個核細(xì)胞(CB MNC)重編程為誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞(iPSC),建立無基因整合的iPSC的高效生成技術(shù)體系,為以后建立疾病iPSC奠定基礎(chǔ)。利用CB MNC,通過比較不同氧含量,誘導(dǎo)質(zhì)粒,MNC培養(yǎng)方法和預(yù)刺激時間等條件對Episomal方法進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:CB MNC采用紅系培養(yǎng)液,培養(yǎng)8 d,使用啟動子為SFFV(spleen focus forming virus)的Episomal載體,在低氧(3%)條件下誘導(dǎo),CB MNC重編程效率最高,可達(dá)到0.12%。通過分析最佳條件下供體細(xì)胞成分發(fā)現(xiàn),表型為CD36+CD71+CD235alow的有核紅細(xì)胞是重編程最主要的供體細(xì)胞來源。結(jié)論:本研究成功建立并優(yōu)化出一種可推廣的高效安全的,可以用于臨床應(yīng)用研究的iPSC誘導(dǎo)技術(shù)。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液病醫(yī)院、血液學(xué)研究所實驗血液學(xué)國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞 臍血 單個核細(xì)胞 Episomal載體 非整合
【基金】：科技部十二五支撐計劃項目(2013BAI01B09) 科技部重大基礎(chǔ)研究項目(2013CB966902,2010CB945204) 國家自然科學(xué)基金項目(81090410,81330015) 天津市科委基礎(chǔ)項目(11JCZDJC27900,13JCYBJC39400)
【分類號】：R329.28
【正文快照】： 2006年,Yamanaka等[1]通過逆轉(zhuǎn)錄病毒把外源基因?qū)氲叫∈蟮某衫w維細(xì)胞中,首次使之重編程為多能性干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,iPSC),2007年這項技術(shù)成功地將人的成纖維細(xì)胞重編程為iPSC[2-3]。體細(xì)胞重編程技術(shù)對再生醫(yī)學(xué)具有重大的意義,由患者自體細(xì)胞誘導(dǎo)的iPS

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本文編號：629905