本文關(guān)鍵詞：一種從大腸桿菌包涵體中分離純化GST-TRAF6融合蛋白的方法

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【摘要】：利用8 mol/L尿素溶液對表達在大腸桿菌包涵體中的GST-TRAF6融合蛋白進行變性,通過逐級稀釋復性的方法對尿素溶解后的GST-TRAF6融合蛋白進行復性,將復性后的GST-TRAF6融合蛋白進一步利用谷胱甘肽瓊脂糖樹脂親和層析的方法進行分離純化,將分離純化后的蛋白通過Western blot方法進行驗證,最后利用體外泛素化反應檢測經(jīng)包涵體變性、復性和純化后的GST-TRAF6融合蛋白的生物學活性。經(jīng)過包涵體變性、梯度稀釋復性和谷胱甘肽瓊脂糖樹脂親和層析3個步驟后純化得到純度達90%以上、濃度為396 ng/μL的蛋白質(zhì)溶液。利用GST蛋白作為對照,經(jīng)Western blot驗證表明,純化得到的蛋白確為GSTTRAF6融合蛋白。進一步利用體外泛素化反應分析其泛素連接酶活性發(fā)現(xiàn),17 ng/μL濃度的GST-TRAF6融合蛋白能夠以泛素分子作為底物在5 min內(nèi)快速催化自由泛素鏈的生成。結(jié)果表明,表達在大腸桿菌包涵體中的GST-TRAF6融合蛋白經(jīng)尿素變性溶解后能夠成功復性并分離純化,在溶解性改變的同時恢復了其泛素連接酶活性。為從大腸桿菌包涵體中大規(guī)模分離純化蛋白質(zhì)提供了一種新的復性方法。
【作者單位】： 天津商業(yè)大學
【關(guān)鍵詞】： TRAF 蛋白純化 包涵體復性 重組蛋白
【基金】：國家自然科學基金項目(81101220) 天津市應用基礎(chǔ)與前沿研究計劃項目(12JCQNJC08100) “十二五”天津市中青年骨干創(chuàng)新人才支持計劃 天津市教委高等學�？萍及l(fā)展基金計劃項目(20130624)
【分類號】：R392
【正文快照】： 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(Tumornecrosis fac-tor receptor-associated factors,TRAFs)是腫瘤壞死因子(Tumornecrosis factor,TNF)超家族和Toll樣/白細胞介素-1受體(toll/IL-1 receptor,TIR)超家族重要的接頭分子,在天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮重要作用[1,2]。TRAFs包括7個密

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1 陳U，

本文編號：629511