目的:探討伯氏瘧原蟲絲/蘇氨酸磷酸酶5(PP5)作為傳播阻斷疫苗候選抗原的可行性。方法:PCR擴(kuò)增PP5的功能區(qū)(407-711 aa),克隆入p ET32a(+)載體。IPTG誘導(dǎo)PP5重組蛋白表達(dá)后,純化重組蛋白并免疫小鼠。ELISA方法檢測(cè)抗PP5免疫血清效價(jià)。實(shí)驗(yàn)觀察免疫血清對(duì)配子體出絲、動(dòng)合子轉(zhuǎn)化率和蚊胃內(nèi)卵囊形成的影響。結(jié)果:成功表達(dá)PP5重組蛋白,抗PP5免疫血清抗體滴度可達(dá)1∶256 000,且對(duì)配子體出絲的抑制呈劑量依賴性,在1∶5和1∶10倍稀釋時(shí),配子體出絲數(shù)目分別減少75%和45%,與對(duì)照組相比差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義0. 05)。免疫血清可顯著抑制動(dòng)合子形成數(shù)目,在1∶5倍稀釋時(shí),動(dòng)合子轉(zhuǎn)化率減少14. 79%(P<0. 05),蚊感染率和胃內(nèi)卵囊密度分別減少26. 05%和74. 19%(P<0. 05)。結(jié)論:PP5蛋白具有良好的免疫原性和抗原性。抗PP5免疫血清具有明顯的傳播阻斷效果。

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圖1PP5重組蛋白表達(dá)檢測(cè)Fig．1ExpressionofrecombinantPP5protein

圖2ELISA法檢測(cè)PP5重組蛋白免疫效果和免疫血清抗體效價(jià)

1∶5稀釋的抗PP5免疫血清可顯著抑制動(dòng)合子轉(zhuǎn)化率，動(dòng)合子轉(zhuǎn)化率減少14.79%(P＜0.05)。同時(shí)，與對(duì)照組相比，1∶5倍稀釋的抗PP5免疫血清可顯著降低蚊感染率26.05%，蚊胃內(nèi)卵囊密度下降圖2ELISA法檢測(cè)PP5重組蛋白免疫效果和免疫血清抗體效價(jià)Fig．2Immune....

圖3抗PP5免疫血清對(duì)配子體出絲的影響Fig．3Effectofanti-PP5serumongametocyteexflagel-

group;PP5.PlasmodiumbergheiPP5recombinantproteinimmunizedgroup.TheupperrightpannelistheresultofendogenousPP5pro-teindetectedbyanti-PP5immune....

圖4抗PP5血清對(duì)動(dòng)合子數(shù)目和形成率的影響Fig．4Effectofanti-PP5serumonookinetenumberand

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