交感神經(jīng)在一些疾病動(dòng)物模型和老年小鼠模型組織中呈現(xiàn)發(fā)芽生長(zhǎng)和密度增加的趨勢(shì)。這提示,交感神經(jīng)與衰老密切相關(guān)。本研究采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)老年小鼠肝、肺、脾組織和人結(jié)腸腺瘤組織衰老模型中交感神經(jīng)標(biāo)記蛋白酪氨酸羥化酶(TH)的表達(dá)情況。結(jié)果證實(shí),衰老組織中的交感神經(jīng)密度顯著增加。然而,目前對(duì)衰老組織的這種生物學(xué)改變機(jī)制尚不明確。本研究以人成纖維細(xì)胞系2BS為實(shí)驗(yàn)材料,經(jīng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn),分泌性軸突導(dǎo)向因子導(dǎo)蛋白-1在衰老細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)。ELISA和實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,在博來霉素、離子射線、癌蛋白R(shí)asV12過表達(dá)所誘導(dǎo)的早衰及復(fù)制性衰老的2BS細(xì)胞中,導(dǎo)蛋白-1的蛋白質(zhì)和mRNA表達(dá)量均比年輕對(duì)照組高。DNA損傷反應(yīng)(DNA damage response,DDR)是調(diào)控衰老細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)表達(dá)的重要途徑。為明確導(dǎo)蛋白-1在衰老細(xì)胞的上調(diào)表達(dá)是否與DDR相關(guān),使用小分子化合物抑制DDR的重要效應(yīng)分子ATM(ataxia telangiectasia mutated)和CHK2(checkpoint kinase 2)在博來霉素誘導(dǎo)的衰老2BS細(xì)胞中的活性。ELISA和實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及衰老細(xì)胞的誘導(dǎo)
    1.3 細(xì)胞總RNA的提取及q PCR檢測(cè)
    1.4 ELISA檢測(cè)衰老細(xì)胞中導(dǎo)蛋白-1蛋白水平的表達(dá)
    1.5 免疫組織化學(xué)檢測(cè)交感神經(jīng)纖維 (TH+) 和衰老組織標(biāo)記物
    1.6 細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶 (SA-β-gal) 染色
    1.7 Western印跡檢測(cè)衰老細(xì)胞中EZH2蛋白含量
    1.8 CHIP和CHIP-qPCR
    1.9 大鼠DRG神經(jīng)元分離培養(yǎng)及共培養(yǎng)
    1.1 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 人結(jié)腸腺瘤及老年鼠組織中交感神經(jīng)支配密度增加
    2.2 軸突導(dǎo)向通路在衰老細(xì)胞與年輕細(xì)胞差異表達(dá)基因集中富集顯著
    2.3 軸突生長(zhǎng)導(dǎo)向因子導(dǎo)蛋白-1在衰老細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)
    2.4 導(dǎo)蛋白-1在衰老細(xì)胞中的分泌不依賴于DDR途徑
    2.5 導(dǎo)蛋白-1在衰老細(xì)胞中表達(dá)增加與EZH2表達(dá)下調(diào)相關(guān)
    2.6 衰老細(xì)胞通過分泌導(dǎo)蛋白-1調(diào)控神經(jīng)軸突生長(zhǎng)
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