發(fā)布時間：2022-01-11 14:03

　　該課題研究長期體外傳代培養(yǎng)對人臍帶間充質干細胞重要生物學屬性的影響。采用組織塊法分離人臍帶間充質干細胞,體外反復傳代培養(yǎng)后比較第5、10、20代細胞的主要生物學屬性:采用細胞計數(shù)法與流式細胞儀檢測不同代次細胞增殖活性和表面免疫標志物;染色體常規(guī)核型分析和微陣列分析檢測其基因穩(wěn)定性;成脂、成骨誘導分化檢測其多向分化潛能;定量RT-PCR檢測端粒酶反轉錄基因hTERT的表達; SA-β-gal活性確定細胞老化狀態(tài)。第5、10、20代臍帶間充質干細胞呈現(xiàn)相同的增殖曲線,各代次干細胞的增殖速率無顯著性差異。不同培養(yǎng)代次的臍帶間充質干細胞表面均呈現(xiàn)CD105、CD90、CD44、CD73高表達, CD19、CD34、CD45及HLA-DR不表達或低表達�；蚍�(wěn)定性分析證實三個代次干細胞均為正常二倍體核型,染色體基因組未發(fā)生基因拷貝數(shù)缺失、重復和大片段純合子現(xiàn)象。成脂和成骨分化潛能以及hTERT表達均未見顯著性差異。SA-β-gal活性檢測顯示,隨培養(yǎng)代次的增加,臍帶間充質干細胞開始呈現(xiàn)衰老征象,尤以第20代明顯。體外反復傳代長期培養(yǎng)對人臍帶間充質干細胞的基本生物學屬性、基因穩(wěn)定性及其多向分化潛能... 

【文章來源】：中國細胞生物學學報. 2019,41(01)CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

HLA-DRnegative.圖2不同代次人臍帶間充質干細?A~C分別代表P5、P10

張權等:長期傳代培養(yǎng)對人臍帶間充質干細胞生物學特性的影響47基因、癌基因、98%OMIMMorbid基因和100%X染色體OMIMMorbid基因,包括了最全面、關聯(lián)性最強的細胞遺傳學分析。詳細信息可參考http://media.affymetrix.com/support/technical/datasheets/cytoscan_hd_datasheet.pdf)。依照不同基因片段拷貝數(shù)增多與缺失的程度及其與疾并癌變基因的關聯(lián)性確定其是否具有臨床意義。染色體微陣列檢測結果顯示,第5、10、20代次傳代培養(yǎng)的hUC-MSCs染色體全基因組掃描分析未檢測到有臨床意義的基因拷貝數(shù)缺失、重復和大片段純合子現(xiàn)象(圖5)。Culturetime(d)1234P5Cellnumber(×105)2.001.601.200.800.40P10P2056不同代次(第5、10、20代)的hUC-MSCs以同樣密度接種于6孔培養(yǎng)板中,每天分別收集3孔不同代次的hUC-MSCs計數(shù)繪制生長曲線。圖示代表3次重復實驗。hUC-MSCsatdifferentpassageswereseededatsamedensityin6-wellplates.TheproliferativecurvesweremadebycountingthecellsharvestedfromthehUC-MSCsatdifferentpassageeveryday.Datawererepresentativeofthreeindependentexperiments.圖3不同代次人臍帶間充質干細胞的增殖活性檢測Fig.3ProliferationcapacityofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsatdifferentpassagesA、B、C分別代表P5、P10、P20代hUC-MSCs核型圖譜。所有代次(第5、10、20代)hUC-MSCs經(jīng)常規(guī)核型分析呈正常雙倍體(46,XY)核型。A,B,CrepresentedP5,P10,P20generationhUC-MSCs,respectively.AllhUC-MSCsanalyzedatdifferentpassagesshowedanormalkaryotype.圖4不同代次人臍帶間充質干細胞常規(guī)核型分析Fig.4ConventionalkaryotypingofhUC-MSCsatdifferentpassages(A)(B)(C)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]臍帶間充質干細胞染色體核型制備及安全評估[J]. 張立新,陳亞寶,葉軍,李林,林梅,黃俊星,吳正東.  海南醫(yī)學. 2012(13)

博士論文
[1]臍帶間充質干細胞臨床前安全性研究[D]. 王有為.北京協(xié)和醫(yī)學院 2013



本文編號：3582909