單純皰疹病毒1型（Herpes simplex virus type 1,HSV-1）潛伏感染期間LATs的活躍轉(zhuǎn)錄可能與其啟動子與增強(qiáng)子兩側(cè)的CTCF結(jié)合序列有關(guān)。本研究對位于UL56下游與LAT啟動子上游之間并與CTCF結(jié)合序列重疊存在的一個新開放讀碼框（本研究中命名為UL57）進(jìn)行了鑒定。首先利用HSV-1（F）細(xì)菌人工染色體（HSV-BAC）系統(tǒng)構(gòu)建重組病毒HSV-EGFP-UL57,將EGFP序列插入UL57 5’端;然后分別通過Northern Blot和Western Blot檢測EGFP標(biāo)記的UL57的轉(zhuǎn)錄和表達(dá);同時構(gòu)建敲除UL57的重組病毒HSV-ΔUL57,觀察UL57對病毒增殖的影響。結(jié)果顯示,重組病毒HSV-EGFP-UL57感染HEp-2細(xì)胞17h后,EGFP探針檢測到兩條轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,其中1.8kb轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物與預(yù)測大小相符;使用放線菌酮（Cycloheximide,CHX）阻斷病毒即刻早期蛋白/早期蛋白合成后,UL57轉(zhuǎn)錄受到明顯抑制。重組病毒HSV-EGFP-UL57感染Vero細(xì)胞后,9h可見融合蛋白表達(dá),24h表達(dá)明顯;融合蛋白分子量與預(yù)測大�。�58kD）... 

【文章來源】：病毒學(xué)報. 2019,35(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

重組病毒HSVEGFPUL57及HSVΔUL57結(jié)構(gòu)示意圖Figure1StructurediagramofthemutantHSV‐EGFP‐UL57andHSV‐ΔUL57

NorthernBlot檢測UL57的轉(zhuǎn)錄Figure2DetectionofUL57transcriptionbyNorthernBlot

伺卸希?臼笛榧觳獾降牧教踝?疾??中，較大且轉(zhuǎn)錄水平較高的條帶（即1.8kb條帶）為目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的可能性較大。而另外一條較小且轉(zhuǎn)錄水平較低的條帶（即1.4kb條帶）可能為前者降解產(chǎn)物。3UL57的轉(zhuǎn)錄依賴病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的調(diào)節(jié)在重組病毒HSV‐EGFP‐UL57感染開始時加入蛋白合成抑制劑放線菌酮（CHX）以抑制病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的合成，感染17h后再檢測UL57轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的合成被抑制后，UL57的轉(zhuǎn)錄水平亦明顯降低（圖3），說明UL57的轉(zhuǎn)錄依賴于病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的表達(dá)和調(diào)節(jié)。4WesternBlot檢測UL57的表達(dá)以1MOI重組病毒HSV‐EGFP‐UL57感染Vero細(xì)胞，24h后分別利用抗c‐myc單抗和抗EGFP單抗檢測UL57融合蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示兩種抗體均可檢測到融合蛋白，但抗EGFP單抗效果更好；融合蛋白分子量與預(yù)測分子量（約58kD）大小基本一致（圖4）。圖1重組病毒HSVEGFPUL57及HSVΔUL57結(jié)構(gòu)示意圖Figure1StructurediagramofthemutantHSV‐EGFP‐UL57andHSV‐ΔUL57圖2NorthernBlot檢測UL57的轉(zhuǎn)錄Figure2DetectionofUL57transcriptionbyNorthernBlot圖3病毒即刻早期蛋白/早期蛋白對UL57轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)Figure3RegulationofUL57transcriptionbyviralimmediate‐early/earlyproteins··54


本文編號：3581931