鈉／碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體（NIS）是位于甲狀腺濾泡細(xì)胞基底膜上的一種糖蛋白，介導(dǎo)甲狀腺激素合成的第一步，即碘的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。NIS在甲狀腺的病理生理中舉足輕重，近年來(lái)它已成為碘缺乏病和其他甲狀腺疾病防治領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 本研究工作中，筆者以大鼠cDNA文庫(kù)為模板，PCR方法擴(kuò)增出全長(zhǎng)大鼠NIS基因編碼序列，克隆入pGEM-T Easy載體。然后將目的片段分別插入非融合型原核表達(dá)載體pBV220和融合型原核表達(dá)載體pGEX-3X中。重組表達(dá)質(zhì)粒pBV220／NIS和pGEX-3X／NIS分別轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5 α和BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá)。據(jù)SDS-PAGE電泳我們發(fā)現(xiàn)前者未見(jiàn)明顯表達(dá)，而后者有期望蛋白表達(dá)。以GST標(biāo)簽抗體行Western blotting進(jìn)一步鑒定該融合蛋白。優(yōu)化表達(dá)條件并對(duì)包涵體進(jìn)行分離、溶解和復(fù)性處理，使得融合蛋白的產(chǎn)量達(dá)總蛋白的58％，相當(dāng)于1.02g／每升培養(yǎng)物。 本實(shí)驗(yàn)在大腸桿菌中成功表達(dá)了大鼠NIS基因，為基因工程制備N(xiāo)IS蛋白奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

lYIS擴(kuò)姍

pGEM-TFJNIS的鑒定

pBV220/NIS的兩切鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]用于PCR實(shí)驗(yàn)的畢赤酵母基因組DNA制備方法的比較[J]. 劇海,梁東春,郭剛,張鏡宇.  天津醫(yī)藥. 2003(05)
[2]谷氨酸脫羧酶抗體的檢測(cè)方法及臨床意義[J]. 任衛(wèi)東,賈淑琴,劉文淑.  醫(yī)學(xué)綜述. 1999(06)



本文編號(hào)：3472769