近二十年來，單克隆抗體已在醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床疾病的診斷等方面得到了廣泛應(yīng)用，但是由于使用的單抗多來源于嚙齒類，應(yīng)用于人體可導(dǎo)致免疫排斥反應(yīng)，從而限制了單抗在疾病治療中的應(yīng)用。臨床應(yīng)用價值高的人源性單抗在制備過程中又存在抗體產(chǎn)量低、不穩(wěn)定、且多為IgM型等困難，至今尚無有效的解決方法。近十年來基因工程技術(shù)的發(fā)展給人們帶來了希望。利用基因重組技術(shù)可對人單抗進(jìn)行改造，抗體可變區(qū)基因克隆后可使其獲得永生化（immortalize），，并可在真核細(xì)胞或原核細(xì)胞中表達(dá)，得到與親本抗體有同樣抗原結(jié)合活性的基因工程抗體。 人-人雜交瘤細(xì)胞系87-2,可分泌抗腎綜合癥出血熱病毒IgM（λ）型人單抗。本文從該雜交瘤細(xì)胞株提取細(xì)胞總RNA,以oligo-d（T）為引物反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。使用根據(jù)人抗體重鏈和λ輕鏈可變區(qū)5’端和3’端保守序列設(shè)計而人工合成的兩對引物，以cDNA鏈為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，將重、輕鏈可變區(qū)基因擴(kuò)增產(chǎn)物插入M13噬菌體，經(jīng)酶切鑒定，篩選到含抗體可變區(qū)基因的重組體，據(jù)此制備單鏈模板，用雙脫氧鏈終止法，測出其核苷酸序列，所得DNA序列經(jīng)計算機分析，輕、重鏈可變區(qū)基因全長分別為 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

抗獨特型抗體種類，

(三)質(zhì)粒pUC1:92686Pb，含有一個54bP的多克隆位點接頭，p一半乳糖昔酶(lacZ)基因插人失活，氨節(jié)青霉素(Amp)抗性(圖1一l一)l乃叩~netof及。hc喇珍筍腸e石burht撇lit口)乙知jv已六.織刀如第4‘頁

’現(xiàn)，細(xì)胞成活率高達(dá)95%以上，同時采用異硫氰酸肌快速一步法，提取細(xì)胞RNA，產(chǎn)物經(jīng)稀釋100倍后經(jīng)紫外測定(圖1一1一4)OD260為1.3794，OD280為0.8077，ODZ印心D28o為1.72.D印artl，;entofBiohcneli‘t盡、TheFouhrt九IIIiOt八產(chǎn)Unive廠女僅xi，na第55頁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一株具有 HFRSV 抗原內(nèi)影像的抗獨特型人單克隆抗體的鑒定[J]. 米力,金伯泉,崔遠(yuǎn)昌,高磊,徐志凱,梁喆,李海鳳.  中國免疫學(xué)雜志. 1992(05)
[2]EB病毒轉(zhuǎn)化的人外周血淋巴細(xì)胞與SHM—D33細(xì)胞系融合制備人單克隆抗體[J]. 崔運昌,朱勇,高磊,孫忱,米力,董幫權(quán).  中國免疫學(xué)雜志. 1989(03)



本文編號：3224436