在細胞信號轉(zhuǎn)導的眾多調(diào)節(jié)過程中，蛋白質(zhì)的磷酸化與去磷酸化是十分重要的環(huán)節(jié)，特定細胞蛋白質(zhì)酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化是細胞信號轉(zhuǎn)導的重要調(diào)節(jié)機制，它是細胞間通信、細胞生長和增殖、細胞周期調(diào)控、分化、惡性腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移、神經(jīng)傳導、血管形成、胚胎形成和許多遺傳病及后天人類疾病的一個關鍵步驟。對蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化的研究已經(jīng)成為生命科學的研究熱點。 SPAP2是免疫受體家族中一個包含兩個ITIM和兩個ITAM的跨膜蛋白質(zhì)，SPAP2的細胞外部分包括6個免疫球蛋白樣的結(jié)構(gòu)域，細胞內(nèi)部分含有兩個ITIM和兩個ITAM， SPAP2的基因包含16個外顯子，定位于人類lq21號染色體上，全長的SPAP2共734個氨基酸殘基，細胞內(nèi)片段有137個氨基酸殘基。當有細胞外信號刺激并激活SPAP2時，鑲嵌在其細胞內(nèi)部的兩個ITIM和兩個ITAM之中的酪氨酸發(fā)生磷酸化，能夠誘導胞漿內(nèi)的SH2-domain containing PTP和PTK由胞漿向細胞膜遷移，并且結(jié)合到磷酸化的ITIM和ITAM上，繼續(xù)進行下游信號轉(zhuǎn)導�？梢娧芯縎PAP2對于揭示SH2-domain containing PTP的生理功能，以及通過研究SPAP2來發(fā)現(xiàn)與其結(jié)合的其它PTP和PTK有重要意義。 SPAP2基因細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的克隆表達 我們利用基因工程技術成功地克隆了SPAP2CT基因，并且構(gòu)建了可溶性表達載體pGex-2T-SPAP2CT質(zhì)粒，經(jīng)序列測定結(jié)果正確；將表達載體轉(zhuǎn)化E. coli DE3-LysS，獲得了高表達菌株并進行了高效表達。 WP=63 2．SPAP2細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的分離純化鑒定 我們應用離子交換、親和層析等技術分離得到了GST-SPAP2CT，經(jīng)SDS-PAGE分析，其純度大于90%，通過Western blot驗證，我們得到的蛋白質(zhì)就是目的蛋白質(zhì)GST-SPAP2CT。 3. SPAP2多克隆抗體的制備 我們用純化得到的GST-SPAP2CT免疫昆明種小白鼠，通過負選擇親和層析柱和PVDF固定抗原親和層析柱制備純化的到了抗SPAP2CT的抗體，經(jīng)ECL檢測抗體效價，符合下一步實驗需要，在-20 oC冰箱保存抗體。 4. SPAP2的功能研究 我們利用免疫沉淀和Western blot等生物學研究手段，對家兔不同組織中SPAP2的表達差異進行分析，同時我們也分析了在各個發(fā)育階段小鼠多種臟器中SPAP2表達水平的變化，結(jié)果表明，在腎臟和腎上腺中SPAP2表達量很高，在肺和胰腺中SPAP2表達量較高，在心臟和肝臟中也有表達，但量很低。由此可見，SPAP2在腺體中高表達可能與調(diào)節(jié)腺體的分泌功能有關。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2004
【中圖分類】：R341
【文章目錄】：
前 言
第一部分 SPAP2基因細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的克隆表達
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
    1.3 結(jié)果與討論
    1.4 小結(jié)
第二部分 SPAP2細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的分離純化鑒定
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 結(jié)果與討論
    2.4 小結(jié)
第三部分 SPAP2多克隆抗體的制備
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
    3.3 結(jié)果與討論
    3 4小結(jié)
第四部分 SPAP2的功能研究
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
    4.3 結(jié)果與討論
    4.4 小結(jié)
參考文獻
致 謝
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英文摘要

【參考文獻】

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1 朱茂祥,吳國利;蛋白質(zhì)酪氨酸脫磷酸化和信號傳導[J];生物化學與生物物理進展;1993年02期

本文編號：2865500