目的探討乙肝病毒X蛋白(HBx)對(duì)條件永生型小鼠足細(xì)胞系(MPC5)增殖與凋亡的影響。方法用攜帶HBx基因的pEX質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MPC5細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組(MPC5 group)、陰性對(duì)照組(MPC5-pEX-neo group)、HBx轉(zhuǎn)染組(MPC5-pEX-HBx group)。MTT法檢測(cè)足細(xì)胞存活率;流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Western blot檢測(cè)細(xì)胞中nephrin、STAT3、JAK2、p-STAT3和p-JAK2、caspase-3蛋白表達(dá)。結(jié)果 HBx轉(zhuǎn)染MPC5細(xì)胞48 h后HBx表達(dá)最高。HBx轉(zhuǎn)染組中nephrin蛋白表達(dá)水平顯著低于空白對(duì)照及陰性對(duì)照(均P0.01)。轉(zhuǎn)染HBx基因后足細(xì)胞增殖明顯受抑,同時(shí)凋亡率顯著增高(均P0.01)。此外,HBx轉(zhuǎn)染組STAT3、p-STAT3、JAK2和p-JAK2蛋白表達(dá)較空白對(duì)照及陰性對(duì)照組均顯著增高(均P0.01), caspase-3在HBx轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)也顯著增高(均P0.01)。結(jié)論 HBx可下調(diào)足細(xì)胞中nephrin蛋白表達(dá),抑制足細(xì)胞增殖,并促進(jìn)其凋亡的發(fā)生。其作用機(jī)制可能與STAT3/JAK2信號(hào)通路活化有關(guān)。
【部分圖文】：

Bx基因在MPC5細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率Table2EfficiencyofHBxgenetransfectioninMPC5(x±s，n=3)groupmＲNA12hours24hours48hours72hoursMPC50.48±0.140.51±0.120.54±0.120.44±0.10MPC5-pEX-neo0.53±0.130.65±0.110.64±0.200.58±0.21MPC5-pEX-HBx0.64±0.11*#18.3±0.25＊＊##593.42±0.56＊＊##88.59±0.33＊＊##*P＜0.05，＊＊P＜0.01comparedwithMPC5group;#P＜0.05，##P＜0.01comparedwithMPC5-pEX-neogroup．*P＜0.01comparedwithMPC5andMPC5-pEX-neogroup圖1HBx轉(zhuǎn)染足細(xì)胞后nephrin蛋白表達(dá)Fig1NephrinexpressionlevelafterpodocytewastransfectedwithHBx(x±s，n=3)916

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床Basic＆ClinicalMedicine2019.39(5)*P＜0.01comparedwithMPC5andMPC5-pEX-neogroups圖2不同組別足細(xì)胞的存活率的比較Fig2Survivalrateofpodocyteindifferentgroups(x±s，n=3)2.4轉(zhuǎn)染HBx對(duì)足細(xì)胞凋亡的影響HBx轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率較空白對(duì)照和陰性對(duì)照組細(xì)胞均顯著增高(P＜0.01)(圖3)。2.5高表達(dá)HBx后足細(xì)胞STAT3、p-STAT3、JAK2及p-JAK2表達(dá)增高，caspase-3表達(dá)上調(diào)轉(zhuǎn)染HBx后STAT3及p-STAT3蛋白表達(dá)較空白對(duì)照及陰性對(duì)照組均增高(P＜0.01)，同時(shí)HBx轉(zhuǎn)染組中JAK2及p-JAK2蛋白表達(dá)水平也顯著增高(P＜0.01)，同步檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白caspase-3(17ku)，其切割產(chǎn)物在HBx轉(zhuǎn)染組中表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.01)(圖4)。3討論HBx基因是HBV復(fù)制所必須的轉(zhuǎn)錄因子，可促進(jìn)病毒復(fù)制，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖中起重要作用。由于HBx廣泛的反式激活特性，對(duì)腎小球足細(xì)胞、系膜細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞都存在影響［6］，HBV-GN患兒的腎小球內(nèi)均存在不同程度的HBx表達(dá)，其主要分布于腎小球足細(xì)胞胞質(zhì)，足細(xì)胞胞核內(nèi)也有少量表達(dá)［7］，這決定了其在HBV-GN的發(fā)病機(jī)制中具有重要的作用。足細(xì)胞轉(zhuǎn)染HBx48h后HBx表達(dá)量最高，而HBx轉(zhuǎn)染組足細(xì)胞增殖效率明顯低于對(duì)照組，這表明HBx具有抑制足細(xì)胞增殖的作用，這一結(jié)果報(bào)道相一致［7］。Nephrin蛋白表達(dá)的變化是足細(xì)胞損傷的主要標(biāo)志物之一，在維持足細(xì)胞骨架及足細(xì)胞裂孔膜的完整性方面具有重要作用［8］，也是蛋白尿產(chǎn)生的主要機(jī)制［9］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染HBx后MP
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本文編號(hào)：2863416