造血干細胞(hematopoietic stem cells,HSC)是具有高度自我更新、增殖和分化能力的一類細胞，移植到體內(nèi)后可以重建各系造血。目前，HSC的主要來源有骨髓、臍帶血及動員后外周血。但無論哪一種來源都存在著一定的缺陷，如數(shù)量不足或者移植后的植入晚等。胚胎干細胞(embryonic stem cells，ES細胞)具有無限增殖潛能，在體外可以向造血細胞分化，為HSC移植開辟了新的來源。然而，由于ES源造血細胞的骨髓植入性和正常造血細胞明顯不同，尚未發(fā)現(xiàn)具備完整基因組的ES源造血細胞移植后使受體造血重建的報道。骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)體外具有造血支持作用，與CD34~+細胞共輸入受者體內(nèi)可以促進HSC向骨髓、脾等造血部位的植入。因此，研究MSC對ES向造血細胞分化過程中的影響，將可能為ES向造血細胞的治療性分化提供有益的信息。 本研究中，我們分離培養(yǎng)了小鼠骨髓MSC，并初步探討了其對ES細胞造血分化的調(diào)控作用。首先，我們采用不同于人MSC的培養(yǎng)方法，利用骨髓細胞與股骨共培養(yǎng)，模擬體內(nèi)骨髓MSC生長的微環(huán)境，加速小鼠MSC的純化培養(yǎng)。然后，對擴增培養(yǎng)的各代細胞進行了表型及分化功能的鑒定。從第四代開始，以后各代細胞CD34、CD45造血細胞及內(nèi)皮細胞的表面標志基本呈陰性，CD29、CD44、CD105及Sca-1等MSC相對特異性的表面標志均有較高的表達；另外，在特定誘導(dǎo)體系內(nèi)擴增培養(yǎng)的各代細胞可以向脂肪細胞、成骨細胞分化。從而說明我們分離培養(yǎng)的細胞為MSC。 在成功分離培養(yǎng)并擴增了小鼠MSC之后，利用ES細胞與其共培養(yǎng)以考察其對ES細胞造血分化的調(diào)控作用。與MSC共培養(yǎng)之后的ES細胞含有顯著增加的擬胚體形成細胞(p＜0.05)，在集落形成細胞(colony-forming cells,CFC)檢測體系內(nèi)未見造血集落生成。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)上述細胞表達ES細 摘要 胞特有的轉(zhuǎn)錄因子O。t－4，不表達造血分化相關(guān)基因Flki、GAh－l、幾HI 而懸浮培養(yǎng)組及與NIH／3T3共培養(yǎng)組細胞發(fā)生分化，產(chǎn)生造血集落，表達造 血特異性基因。這些結(jié)果表明：骨髓MSC能夠抑制ES細胞的初始分化。 有趣的是，通過CFC檢測發(fā)現(xiàn)：與其它兩組比較，MSC共培養(yǎng)組來源 的擬胚體中含有顯著增加的CFC數(shù)目Om．05卜與MSC共培養(yǎng)16天的細 胞所形成的擬胚體中含有 CFC最多，其數(shù)目可達 668土58．59465個／IX 10屯B 細胞，而懸浮培養(yǎng)組及與NIW3T3共培養(yǎng)組中擬胚體的CFC產(chǎn)率最高為 213．3士35．5個與278．7士35．3個。此夕，與MSC共培養(yǎng)之后，ES細胞的 巨核細胞分化比例有顯著提高h狽．05肝因此，MSC與ES細胞共培養(yǎng)可以 高效誘導(dǎo)ES細胞向造血細胞分化，這可能與MSC分泌SCF，IL＊，TPO 及SDFq等造血細胞因子有一定關(guān)系。但其具體機制仍有待于更深入的研究。 鑒于小鼠骨髓來源的MSC對ES細胞體外培養(yǎng)的全能性（Totipotency）維持 及造血活性誘導(dǎo)作用的多樣性。因此，洞悉此調(diào)控作用的分子機制，及其在 未來的ES細胞／造血組織工程中的策略性應(yīng)用，必將推動相關(guān)領(lǐng)域的工作進 展。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R329
【文章目錄】：
前言
第一部分 骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定
    材料和方法
    結(jié)果
    小結(jié)
第二部分 MSC對ES細胞造血分化的調(diào)控作用
    材料和方法
    結(jié)果
    小結(jié)
討論
總結(jié)
參考文獻
致謝
文獻綜述
附將發(fā)表文章: 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞對胚胎干細胞造血分化的影響中國實驗血液學(xué)雜志2003，11（3）

【共引文獻】

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本文編號：2853358