【摘要】：目的 對于神經(jīng)系統(tǒng)疾病所致的神經(jīng)功能障礙理想的治療方法就是神經(jīng)細(xì)胞移植,現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)認(rèn)為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Marrow stromal stem cells, MSCs)是神經(jīng)細(xì)胞移植理想的供體來源。為了探討堿性成纖維生長因子（Basic fibroblast growth factor ,bFGF）對MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的作用及其機(jī)制，本課題利用bFGF與不同生長因子和化學(xué)誘導(dǎo)劑組合誘導(dǎo)MSCs向神經(jīng)元轉(zhuǎn)化，以期了解bFGF在MSCs轉(zhuǎn)分化中的作用機(jī)制，為MSCs用于神經(jīng)細(xì)胞移植提供重要基礎(chǔ)。 方法 選擇以下不同條件，誘導(dǎo)MSCs向神經(jīng)元轉(zhuǎn)化：第1組：不預(yù)誘導(dǎo)，接種細(xì)胞一天后加2%二甲基亞砜( Dimethyl sulfoxide ,DMSO)+200umol/L三羥基四甲基茴香醚 (Butylated hydroxyanisole ,BHA)和不含血清的DMEM/F12；第2組：10ng/mlbFGF預(yù)誘導(dǎo)一天,再加2%DMSO+200umol/LBHA和不含血清的DMEM/F12；第3 WP=6 組：0.5umol/L全反式維甲酸(All trans-retinoic acid, ATRA)+10ng/mlbFGF預(yù)處理一天，再用加2%DMSO +200umol/L BHA和不含血清的DMEM/F12；第4組: 10ng/mlbFGF預(yù)處理一天，再加不含血清的改良的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基（Modified neuronal medium, MNM）處理；觀察分化過程中細(xì)胞形態(tài)、數(shù)目的變化，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測分化后細(xì)胞神經(jīng)元烯醇化酶（Neuron specific enolase, NSE）、微管相關(guān)蛋白2（Microtubule associated protein2, MAP2）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrillary acid protein, GFAP）以及N-甲基(酰)-D-門冬氨酸受體（NMDAR）和五羥色胺受體1D（ 5-Hydroxy tryptamine1D,）的表達(dá)情況，并計(jì)算轉(zhuǎn)化率；觀察FGFR的表達(dá)及誘導(dǎo)后不同時間點(diǎn)原癌基因c-myc蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 1. 經(jīng)各組條件誘導(dǎo)后，MSCs均能分化為具有典型神 經(jīng)元形態(tài)的細(xì)胞，并明顯表達(dá)NSE、MAP2、NMDAR和5-HT1D，但不表達(dá)GFAP；2.各組誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化率相比較，第2和3組即經(jīng)bFGF，ATRA＋bFGF預(yù)誘導(dǎo)組明顯高于不預(yù)誘導(dǎo)的第1組，第四組的轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)95%以上；3.誘導(dǎo)后的神經(jīng)元樣細(xì)胞FGFR-3表達(dá)明顯增強(qiáng)，F(xiàn)GFR-1無明顯改變；4.誘導(dǎo)后的神經(jīng)元樣細(xì)胞4小時開始表達(dá)c-myc蛋白，持續(xù)表達(dá)至36小時。 WP=7 結(jié)論 以DMSO和BHA為基礎(chǔ)誘導(dǎo)劑，bFGF預(yù)處理可明顯提 高M(jìn)SCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率達(dá)30%之多；首次發(fā)現(xiàn)濃度為10ng/ml的bFGF主要是通過FGFR-3作用于MSCs，基本上不通過FGFR-1；首次發(fā)現(xiàn)在MSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化中的過程中，c-myc可能發(fā)揮著促進(jìn)MSCs轉(zhuǎn)分化與凋亡雙重作用
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R329

【共引文獻(xiàn)】

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2 孫燕,史小林;胚胎源性干細(xì)胞分化研究的現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊;2005年02期

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9 周玉峰,方峰,董永綏,李革,甄宏,易文龍,向稚丹;An Improved Method for Directional Differentiation and Efficient Production of Neurons from Embryonic Stem Cells in vitro[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年01期

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本文編號：2798268