【摘要】： 有關衰老的研究在基礎和臨床醫(yī)學中都是一個被重視的課題。隨著 社會人口老齡化，有關衰老尤其是腦衰老的研究，已經(jīng)成為研究的熱點。 在探討腦的衰老變化機理研究中，腦內(nèi)生長抑素（Somatostatin，SS） 的變化是人們頗為關注的神經(jīng)肽之一。SS為環(huán)狀14肽，與學習記憶密切 相關，目前研究已確認，海馬結構內(nèi)的SS神經(jīng)元與垂體前葉生長激素的 分泌和釋放活動沒有直接關系，而與學習、記憶密切相關，具有抗遺忘 作用，是記憶的物質基礎，已有研究資料表明，老齡大鼠海馬SS水平低 下，SS陽性神經(jīng)元密度降低。 人參總皂甙是傳統(tǒng)中藥人參的主要有效成分之一，具有人參的主要 生理活性，近年來有關人參總皂甙抗衰老研究十分熱門，已有研究資料 表明，人參總皂甙可以有效延緩神經(jīng)系統(tǒng)機能的老齡性退變。然而，有 —— 關人參總皂貳對衰老大鼠海馬內(nèi)SS神經(jīng)元作用的研究，國內(nèi)外未見報道。 本課題采用卜半乳糖亞急性中毒衰老模型大鼠，應用免疫組化ABCfk檢測 大鼠海馬SS陽性神經(jīng)元分布，觀察人參總皂貳對衰老大鼠海馬生長抑素 變化的影響，探討人參總皂貳的抗衰老作用。 一、材料和方法 （一）動物分組 18只Wistar大鼠（雄性，體重265士369，四月齡），隨機分為對照 組、造模組和給藥組三組，每組6只。 （二）衰老模型的建立及給藥 造模組：皮下注射卜半乳糖（48mg／kg”d）6周。 給藥組：皮下注射卜半乳糖N8峪八g”d）同時給予人參總皂貳灌胃 （50mg／kg”d）6周。 對照組：皮下注射生理鹽水u 八g’d）6周。 （三）取材、固定、切片 各組大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉（46mg／kg）腹腔注射麻醉，開胸，經(jīng)左心 室4％多聚甲醛緩沖液灌注取腦，入4％多聚甲醛緩沖液后固定6－8小時， 常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，Leitz切片機鼠腦冠狀位連續(xù)切片，片厚5 u m。 （四）免疫組他BC法檢挪S 采用華美公司提供的全組分ABC免疫組化檢測試劑盒，一抗為兔抗SS 血清（二軍大神經(jīng)生物學教研室），＊ 1500稀釋，結合時間：濕盒中 4 oC過夜。其余操作按試劑盒說明書進行。 DAB染色、復染封片，01y晌us光鏡下觀察。 一2一 —— ABC法染色的同時，分別做陽性對照和陰性對照。 （五）圖像分析 每個標本選擇2張相同斷面的切片，在olympus BHZ顯微鏡10X 10下， 用JVC Digital Ca。era分別對各組切片的m、CA3、CA4＆DG區(qū)進行采樣 （采樣過程中保持光源亮度恒定，以保證各組切片光密度的可比性）， 采樣結果輸入計算機，應用HPIAS－1000（高清晰度病理圖文分析系統(tǒng)， High resolution Pathological Image Analysis Syste。，同濟醫(yī)科大 學）進行圖像分析，測定SS陽性神經(jīng)元的積分光密度。在olympus顯微鏡 下用測微尺計數(shù)SS陽性神經(jīng)元（個／m。z）。 （六）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)以平均數(shù)士標準差表示，用SPSS 8．0統(tǒng)計軟件進行 單因素方差分析（one－。ay ANOVA）。 二、結果和討論 （一）各組大鼠海馬SS免疫陽性神經(jīng)元定量分析結果比較 表1 三組大鼠海馬SS陽性神經(jīng)元計數(shù)（個／mmz） 組別n CAI CA3 CA4＆DG 對照組6 89．17士16．55All6．33士11．83A 183．67士23．18A 造模紐 6 35．00士4．94““58．17is．13““68．33士8．89”“ 給藥組 6 79．32土8．94八 107．17土13．”凸 180．弧士ZI．22凸 注：幼示與對照組比較，P＜0．of ；八示與造模組比較，P＜0．of －3－ —— 表二 三組大鼠海馬SS免疫陽性神經(jīng)元積分光密度 組別n CAI CA3 CA4＆DG 對照組6 12．70士l．33 12．62土l．69 13．48士l．58 造模組6 6．99土0．61““6．93土0．34““7．20土0．44““ 給藥組6 12．25士1．43八 12．47土1．46么 12．59士1．36A 注：林示與對照組比較，P刃．01；A示與造模組比較，P吻．01 實驗結果顯示，給藥組與造模組比較，海馬各區(qū)SS陽性神經(jīng)元數(shù)目 和積分光密度均有顯著增加（P＜0．01）。給藥組與對照組相比，海馬各 區(qū)SS陽性神經(jīng)元數(shù)目和積分光密度無統(tǒng)計學差異（P＞0．15）。提示人參 總皂貳對卜半乳糖加速衰老模型大鼠海馬SS能神經(jīng)元有較好的保護作 用。 二四－半乳糖致大鼠亞急性衰老模型在抗衰老研究中的應用 D－半乳糖致大鼠亞急性衰老模型是以衰老自由基代謝紊亂學說為理 論基礎建立的一種簡便實用可靠的衰老動物模型，在國內(nèi)外抗衰老研究 中得到廣泛應用。本實驗結果表明衰老模型大鼠海馬內(nèi)SS陽性神經(jīng)元數(shù) 目及積分光密度均比正常對照組顯著減少（p＜0．of），與己有報道一致， 從一定程度上證實了D－半乳糖致大鼠衰老模型是一種簡便、優(yōu)良的衰老 模型。 （三）海馬SS＄齡變化與認知障礙的關系 海馬結構內(nèi)的SS陽性神經(jīng)元與學習、記憶密切相關。SS有利于記憶 的強化，具有抗遺忘作用，是記憶的物質基礎。已有研究資料表明，衰 老大鼠海馬SS水平低下，SS陽性神經(jīng)?
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：R339.3

【參考文獻】

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本文編號：2783579