本文關(guān)鍵詞：哺乳動物上皮細(xì)胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：登革病毒(dengue virus,DENV)屬于黃病毒科(Flavivirade)黃病毒屬(Flavivirus),是目前世界上分布最廣泛的由蚊類傳播的蟲媒病毒。截至目前,還沒有安全有效的疫苗或者抗病毒藥物來治療登革病毒引起的疾病。鞘糖脂是由神經(jīng)酰胺和糖類構(gòu)成的糖脂分子,普遍分布于真核細(xì)胞的膜類結(jié)構(gòu)上。最近,有研究發(fā)現(xiàn)鞘糖脂通過調(diào)節(jié)病毒感染宿主細(xì)胞的多個步驟來參與病毒感染。然而,鞘糖脂在登革病毒感染中的具體作用仍然不明確。在本研究中,我們采用小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞和缺失鞘糖脂的突變體GM95細(xì)胞來研究鞘糖脂在登革病毒感染中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型B16細(xì)胞相比,缺失鞘糖脂的GM95細(xì)胞對登革病毒極不敏感:GM95細(xì)胞中病毒的復(fù)制水平,細(xì)胞上清中的活病毒量,都比野生型對照B16細(xì)胞中顯著降低。用抑制鞘糖脂合成的抑制劑大豆皂苷或者PPMP來處理B16細(xì)胞,或者用RNAi的方法干擾B16細(xì)胞中三種主要鞘糖脂合成酶(mt3gal5,ma4Gal T or mb3Gn T),都能抑制登革病毒感染。相反地,在GM95細(xì)胞中加入外源鞘糖脂GM3,能部分的恢復(fù)登革病毒感染。同時,我們發(fā)現(xiàn)B16細(xì)胞感染登革病毒后,代表性的酸性鞘糖脂GM3的含量顯著上升,鞘糖脂合成酶基因的表達(dá)也顯著上調(diào)。這些結(jié)果提示了鞘糖脂在登革病毒感染上皮細(xì)胞B16過程中發(fā)揮作用。為了研究鞘糖脂參與登革病毒感染細(xì)胞的具體機(jī)制,我們用病毒基因定量PCR測定和羅丹明染料標(biāo)記登革病毒等方法,來研究B16和GM95細(xì)胞對登革病毒的結(jié)合和內(nèi)吞效率。結(jié)果表明,GM95細(xì)胞結(jié)合和內(nèi)吞登革病毒的能力與B16細(xì)胞相比并無顯著性差異。進(jìn)一步實驗發(fā)現(xiàn),鞘糖脂對登革病毒的RNA復(fù)制起重要作用。向B16和GM95細(xì)胞中轉(zhuǎn)染DNA型登革病毒復(fù)制子后,復(fù)制子在B16細(xì)胞中的復(fù)制水平顯著地高于GM95細(xì)胞。此外,在登革病毒感染的B16細(xì)胞胞質(zhì)中,病毒復(fù)制復(fù)合物的組成成分之一非結(jié)構(gòu)蛋白NS4A與鞘糖脂GM3在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜區(qū)域有部分共定位。這些實驗數(shù)據(jù)表明,鞘糖脂不參與上皮細(xì)胞對登革病毒的結(jié)合和內(nèi)吞作用,但影響病毒復(fù)制。靶向鞘糖脂的合成可成為潛在的抑制登革病毒感染的新思路。
【關(guān)鍵詞】：登革病毒 鞘糖脂 病毒復(fù)制復(fù)合物
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-8
• 前言8-12
• 材料與方法12-23
• 一、實驗材料12-14
• 二、實驗方法14-23
• 實驗結(jié)果23-39
• 一、缺失鞘糖脂的GM95細(xì)胞對登革病毒不敏感23-26
• 二、抑制野生型B16細(xì)胞中鞘糖脂的合成能抑制登革病毒的感染26-29
• 三、鞘糖脂GM3在登革病毒感染的B16細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)29-31
• 四、鞘糖脂不影響細(xì)胞對登革病毒的結(jié)合和內(nèi)吞31-34
• 五、鞘糖脂的缺失影響登革病毒的復(fù)制34-37
• 六、鞘糖脂GM3與登革病毒RNA復(fù)制復(fù)合物共定位37-39
• 討論39-42
• 小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述 鞘糖脂與病毒感染的關(guān)系及其在抗病毒中的作用48-58
• 一、鞘糖脂的結(jié)構(gòu)、分類及生物合成48-49
• 二、病毒的生活周期49-50
• 三、鞘糖脂與病毒的生活周期50-52
• 四、鞘糖脂的抗病毒作用52
• 展望52-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 碩士期間所完成的論文58-59
• 附錄59-60
• 致謝60-61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王艷萍;王征;朱健;俞云會;許秀坤;李云森;;鞘糖脂研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2011年06期

  本文關(guān)鍵詞：哺乳動物上皮細(xì)胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：278177