【摘要】：目的：提高抗人乙酰膽堿受體主要免疫原區(qū)單鏈抗體(ScFv)的穩(wěn)定性，制備單鏈抗體-人血清白蛋白(HSA)融合蛋白。方法：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增人血清白蛋白基因，并克隆到含有抗人乙酰膽堿受體單鏈抗體(ScFv637)的載體pHEN2(pHEN2-ScFv637)上。將重組質(zhì)粒pHEN2-ScFv637-HSA轉(zhuǎn)化大腸桿菌Ecoli DH5α，分離提純重組質(zhì)粒后再經(jīng)酶切、瓊脂糖凝膠電泳檢查以確認(rèn)融合基因的正確性。將電泳檢查后確認(rèn)的融合基因測(cè)序。將含有融合基因的載體pHEN2(含有pelB引導(dǎo)肽和c-myc)在大腸桿菌Ecoli HB2151外周質(zhì)中表達(dá)。應(yīng)用鼠抗c-myc單克隆抗體的斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)檢查細(xì)菌外周質(zhì)裂解物中融合蛋白的表達(dá)，并用十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和免疫印跡試驗(yàn)(WB)確認(rèn)了融合蛋白的分子量。結(jié)果：電泳檢查發(fā)現(xiàn)了大小分別為1770 bp和7054 bp的人血清白蛋白基因和融合基因，且位置正確；構(gòu)建的ScFv637-HSA經(jīng)測(cè)序發(fā)現(xiàn)核苷酸序列正確，并且正確克隆至載體開(kāi)放瀆碼框架內(nèi)；含有單鏈抗體與人血清白蛋白的融合蛋白表達(dá)在細(xì)菌外周質(zhì)中，培養(yǎng)液上清及對(duì)照大腸桿菌外周質(zhì)和培養(yǎng)液上清均未發(fā)現(xiàn)融合蛋白；用SDS-PAGE和WB發(fā)現(xiàn)了在分子量約為111.4KD處出現(xiàn)一條單一帶。結(jié)論：成功地制備了單鏈抗體ScFv637與人血清白蛋白融合蛋白，為進(jìn)一步其研究應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 鞠武建,胡美浩;導(dǎo)向溶栓分子scFv-UK32中連接肽的引入和在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2001年06期

2 楊康鵑,孟繁平,M.Stassen,M.de Baets;抗乙酰膽堿受體單鏈抗體在大腸桿菌中的表達(dá)[J];延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào);2002年02期

本文編號(hào)：2745720