本文關鍵詞：綿羊臍帶和羊水間充質干細胞的分禽培養(yǎng)及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：間充質干細胞(Msenchymal stem cells, MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞。MSCs存在于動物胎兒和成體多種組織中,目前已經從多個物種的多種組織中提取分離出MSCs,而研究最多的MSCs主要是骨髓源的MSCs。本研究以綿羊臍帶和羊水組織為材料來源,分別采用酶消化法和離心分離法培養(yǎng)獲得目的細胞,并大量凍存了第三代的細胞。然后,以第五代細胞為實驗對象,對得到的細胞進行了形態(tài)學、生長性能、表面標志等方面的鑒定,最后,進行成脂、成骨、成軟骨的誘導分化,驗證其多能性。結果顯示分離得到的細胞形態(tài)均一,呈現(xiàn)成纖維樣細胞形態(tài),增殖能力旺盛,在體外傳代培養(yǎng)至20代時細胞仍然保持良好的生物學性狀；傳代至第20代時,仍具有正常二倍體核型(2n=54)；免疫細胞化學檢測顯示細胞表達表面標記CD13、CD29、CD44、CD90和CD106,不表達造血干細胞標志基因CD45。結果表明本研究分離得到的細胞具備MSCs的生物學特性。進一步通過細胞染色及實時定量PCR技術驗證了其體外誘導分化能力,結果顯示：成脂誘導后,細胞經油紅-O染色可見明顯脂滴,RT-PCR顯示成脂細胞特異性基因硬脂酰CoA去飽和酶(SCD)、過氧化物酶體增殖物激活受體G(PPARG)表達呈陽性；成骨誘導后,經AgN03染色后可見鈣鹽沉積,實時定量PCR顯示成骨細胞特異性基因膠原蛋白Ⅰ(BGLAP)表達呈陽性；成軟骨誘導后,經阿利新藍染色后呈藍色,PCR顯示成軟骨特異基因光蛋白聚糖(LUM)和雙鏈蛋白聚糖(BGN)表達呈陽性,以上結果表明所分離的MSCs可以成功向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞分化。綜上所述,我們成功建立了綿羊MSCs分離、純化及鑒定平臺,得到了綿羊臍帶和羊水MSCs,有望用于后續(xù)研究。
【關鍵詞】：綿羊 臍帶 羊水 間充質干細胞
【學位授予單位】：內蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 縮略詞及中英文對照表9-11
• 第一章 綿羊間充質干細胞的研究進展11-25
• 一、MSCs的生物學特征11-14
• 1.1 MSCs的來源及定義11-12
• 1.2 MSCs的表面標志12-13
• 1.3 MSCs的可塑性13
• 1.4 MSCs的免疫原性13-14
• 二、綿羊MSCs的生物學特性14-15
• 2.1 綿羊MSCs的來源14
• 2.2 綿羊MSCs的表面標志14-15
• 2.3 綿羊MSCs可塑性15
• 三、綿羊MSCs的應用研究15-17
• 3.1 骨缺陷的應用16-17
• 3.2 瓣膜缺陷的應用17
• 3.3 其他應用17
• 四、存在的問題以及前景17-18
• 參考文獻18-25
• 第二章 綿羊臍帶和羊水間充質干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定25-45
• 一、引言25-26
• 二、實驗材料和方法26-36
• 2.1 實驗材料和儀器26-29
• 2.2 實驗方法29-36
• 三、實驗結果36-44
• 3.1 形態(tài)學觀察36-37
• 3.2 第20代細胞核型37-38
• 3.3 增殖能力檢測38-39
• 3.4 表面標志檢測39-40
• 3.5 體外多向分化能力檢測40-44
• 四、討論44-45
• 結論45-46
• 參考文獻46-50
• 致謝50

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