【摘要】：目的：構(gòu)建含有凋亡抑制因子Svv基因的原核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，，誘導(dǎo)表達(dá)出目的蛋白后，用原核表達(dá)產(chǎn)物作為抗原制備單抗。 方法：(1)以RT-PCR方法擴(kuò)增目的基因，擴(kuò)增產(chǎn)物純化后克隆至測(cè)序載體pGEM-T-easy，挑取陽(yáng)性克隆經(jīng)鑒定后測(cè)序。將測(cè)序正確的目的基因Svv克隆至pRSET-c表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)間，構(gòu)建含有目的基因的表達(dá)載體，pRSET-c-Svv。(2)利用基因工程技術(shù)，用重組質(zhì)粒pRSET-c-Svv轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，表達(dá)目的蛋白。(3)將純化后的目的蛋白制備成抗原，免疫Balb／c小鼠，取小鼠脾細(xì)胞與Sp2／0小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，建立雜交瘤細(xì)胞系，采用ELISA檢測(cè)上清中抗體蛋白的分泌表達(dá)。 結(jié)果：(1)經(jīng)測(cè)序，限制性酶切分析及PCR方法鑒定，目的基因被插入表達(dá)載體中，成功構(gòu)建原核表達(dá)載體。(2)經(jīng)SDS-PAGE鑒定，轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌，高效表達(dá)目的基因蛋白。(3)融合后的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)間接ELISA法鑒定，獲得的4個(gè)陽(yáng)性反應(yīng)孔。至此，初步制備Svv蛋白的 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 單抗。雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)及單抗的全面鑒定，還將繼續(xù)進(jìn)行。 結(jié)論:抗凋亡因子S。的成功克隆、原核表達(dá)蛋白的獲得及其單克 隆抗體的制備，為S。蛋白的細(xì)胞凋亡調(diào)控功能、在腫瘤細(xì)胞選擇性表 達(dá)機(jī)理等的深入研究提供了部分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，也為腫瘤的荃因治療提供了新 思路。尤其是單克隆抗體的成功制備，在腫瘤診斷和治療方面將有一定潛 在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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2 史惠蓉,喬玉環(huán),李克虹,劉鴻霞,陳亞麗,張欽憲;Survivin反義核酸對(duì)拓?fù)涮婵嫡T導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年04期

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10 張玉清;Survivin在胰腺癌中的表達(dá)及其與Bcl-2表達(dá)相關(guān)性的初步研究[D];武漢大學(xué);2004年

本文編號(hào)：2711004