【摘要】：背景與目的 在全民補碘二十年余后，碘缺乏病已經(jīng)得到基本控制的今天，仍有大量弱智兒童出現(xiàn)的事實，促使我們在補碘的同時尋找影響神經(jīng)細胞發(fā)育的碘外因素。硒作為對腦發(fā)育影響的一個重要元素越來越引起學者們的關(guān)注。已有研究表明硒作為硒蛋白的必需組份，是體內(nèi)許多酶的重要構(gòu)成成分和活性中心，，它在機體中發(fā)揮著重要的作用，如谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、甲狀腺激素代謝調(diào)節(jié)的三種脫碘酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型、硒蛋白P、硒蛋白W等。這些含硒酶對神經(jīng)細胞發(fā)育有著重要的影響。課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)硒對大鼠腦神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有一定的影響。但在低硒時，與神經(jīng)細胞增殖分化密切相關(guān)EGFR／MAPK(ERK1／2)信號傳導通路的實驗研究未見有文獻報道。本研究以本課題組已經(jīng)建立的連續(xù)人工膳食性低硒動物模型仔三代SD大鼠為實驗對象，分別檢測和分析了對照(補硒補碘)、單純低碘、單純低硒和低硒低碘仔三代新生4天和斷乳21天大鼠腦海馬、前皮層的增殖分化相關(guān)蛋白EGFR，及其下游MAPK信號蛋白表達及對MAPK級聯(lián)下游增殖分化相關(guān)核基因c-Fos及對增殖信號傳導起調(diào)節(jié)作用的神經(jīng)遞質(zhì)受體5-HT_(1A)R表達的影響。試圖初步探索在低硒時MAPK信號通路主要相關(guān)信號分子的變化，為進一步深 汕頭大學醫(yī)學院碩士學位論文 入探討硒和硒碘聯(lián)合缺乏對神經(jīng)細胞生長發(fā)育影響的分子機制提供 實驗依據(jù)。 材料與方法 利用本課題組已建立的連續(xù)人工膳食性低硒動物模型仔三代大 鼠，檢側(cè)對照組(補硒補碘組，CTL)、單純低碘組(I一)、單純低硒組 (se一)和低硒低碘組(se一1一)的新生4天和斷乳21天大鼠腦海馬、前皮 層部位的EGFR、a一MAPK、a一PERKI/2、e一Fos、5一HT，^R蛋白的表 達，利用免疫組織化學進行蛋白表達的形態(tài)學定位，并用Western blot 方法檢測組織蛋白的表達并利用Bi。一RadQuantity4，5.2軟件分析其表 達水平。 結(jié)果 結(jié)果I:低硒膳食對仔三代新生鼠(4日齡)大鼠腦MAPK信號傳導 通路主要相關(guān)蛋白表達的影響 一新生4日齡鼠腦增殖分化相關(guān)蛋白EGFR的表達 1.免疫組化: 海馬部位:海馬CAI區(qū)各實驗組EGFR蛋白表達與對照組相比表 達均降低，以低硒低碘組最低，低碘組其次;但各組間兩兩比較無 顯著差異。海馬CA3區(qū)EGFR蛋白表達各實驗組與對照組相比表達均 降低，以低硒低碘組最低(PO.01)，低硒組其次(P0.01)，低碘組 再次(P(0.05)。 前皮層部位:各實驗組EGFR蛋白表達與對照組相比表達均降低， 以單純低硒組最低，單純低碘組其次(各實驗組與對照組間比較 P(0 .01)。 2.Weotern blot檢側(cè)4日齡全腦EGFR蛋白分析:各組間EGFR蛋 白表達略有差異，但差異均沒有統(tǒng)計學意義。 汕頭大學醫(yī)學院碩士學位論文 二、新生4日齡鼠MAPK和p一ERKllZ蛋白的表達 (一)、新生4日齡鼠MAPK(E RKllZ)蛋白的表達:免疫組化海馬、 前皮層部位及Western bfot全腦MAPK表達結(jié)果均顯示:各實驗組與 對照組間比較沒有統(tǒng)計學差異。 (二).新生4日齡鼠p一MAPK(p一ERKll2)蛋白的表達 1.免疫組化 海馬部位:海馬CAI區(qū)各實驗組p一MAPK表達平均陽性細胞絕對 數(shù)比對照組明顯降低(P0.01)，單純低硒組表達幾乎陰性，低硒低 碘組其次。海馬CA3區(qū)各實驗組p一MAPK表達比對照組表達明顯降 低(P0.01)，單純低硒組表達幾乎陰性，低硒低碘組其次。 前皮層部位:各實驗組p一MAPK表達與對照組相比表達均降低 (P0 .01)，以低硒組最低，低硒低碘組其次。 2.western blot檢側(cè)4日齡鼠全腦p一MApK(p一ERKllZ)蛋白分析: p一ERKl(p·P44MAPK)蛋白表達:各實驗組與對照組間比較 p一ERKI磷酸化程度都有表達降低的趨勢，以單純低硒組(P=o.090) 最低，低硒低碘組其次，但沒有顯著性差異。 p一ERKZ(p一P42MAPK)蛋白表達:各實驗組與對照組間比較 p一ERKZ磷酸化程度都有表達降低的趨勢，以低硒組表達最低，低硒 低碘組其次，但沒有顯著性差異。 三、新生4日齡鼠核蛋白c一FO:的表達 1.免疫組化 海馬部位:海馬CAI區(qū)c一Fos蛋白表達低碘組(P0，05)及低硒組 與對照組相比表達增加;低硒低碘組表達降低，但沒有統(tǒng)計學差異; 海馬CA3區(qū)c一Fos蛋白表達低碘組(P0.01)及低硒低碘組(P0，05) 與對照組間比較表達增加:低硒組與對照組間比較表達降低，但無 統(tǒng)計學差異。 前皮層部位:各實驗組與對照組間比較均沒有顯著性差異。 一一一一一一一一一一一一一一一一里燮烈墮弊旗齊. 2.westero blot檢側(cè)4日齡鼠全腦。一F。。蛋白分析:各實驗組間兩兩 比較均沒有顯著性差異。 四、4日齡最腦神經(jīng)遞質(zhì)受體5一HTIAR蛋白的表達 1.免疫組化 海馬部位:海馬CAI區(qū)5一HT、^R蛋白各實驗組與對照組相比表達 均降低(P0.01)，以低硒低碘組表達最低，‘低硒組其次。海馬cA3 區(qū)各實驗組與對照組相比表達均降低，以低硒低碘組表達最低 (P(0.01)，低硒組其次(P(0.01); 前皮層部位:5一HTIAR蛋白各實驗組與對照組間比較沒有統(tǒng)計學 顯著性差異。 2.Western blot檢側(cè)4日齡全腦5一HT一^R蛋白分析:各實驗組與對 照組間比較均沒有顯著差異。 結(jié)果11低硒膳食對仔三代發(fā)育期(21日齡)斷
【圖文】：

以出:馬C區(qū)與比

汕頭大學醫(yī)學院碩士圈，連續(xù)人工膳食性低硒動物模型仔三代4日齡大鼠腦海馬CA卜CAp一MAPK蛋白免疫組化平均陽性細胞絕對數(shù)變化組別海馬cAI區(qū)對照組19.00士1.87海馬以3區(qū)18.20士4‘86低碘組低硒組6_33士6.026_67士5.770_00士0.000，00士0_00低硒低碘組306士l，15100士l，73:，P<0.05二P<0.01*表示對照組與其它組的比較;
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R363

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本文編號：2632401