本文關(guān)鍵詞：Th1細胞誘導胸腺上皮細胞凋亡及其機制的初步探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:初步探討活化的Th1細胞誘導胸腺上皮細胞的凋亡和機制,以及強力霉素逆轉(zhuǎn)其凋亡的機制,為臨床重建T細胞免疫奠定實驗室研究基礎(chǔ)。方法:分選C57BL/6小鼠CD4+T細胞,經(jīng)IL-12、IL-2和anti-IL-4誘導分化為Th1細胞。將誘導的Th1細胞或其上清分別與胸腺上皮細胞系MTEC1共育,加或不加anti-IFN-γ抗體處理,采用流式細胞術(shù)分析MTEC1細胞的凋亡水平。為進一步驗證在炎癥狀態(tài)下活化的Th1細胞能否回遷到胸腺中,從而誘導胸腺上皮細胞凋亡,我們采用心臟內(nèi)注射經(jīng)CFSE熒光染料標記的Th1細胞,流式細胞術(shù)檢測胸腺細胞中標記細胞的比例。不同濃度強力霉素處理與IFN-γ共培養(yǎng)的MTEC1細胞后,流式細胞術(shù)觀察是否可部分或完全逆轉(zhuǎn)細胞凋亡,最后利用免疫印跡技術(shù)檢測Trx2、Bcl-2和Bax蛋白水平的變化。結(jié)果:經(jīng)過Th1細胞或Th1細胞上清液處理的MTEC1細胞凋亡增加,而在體系中加入anti-IFN-γ抗體后,可部分逆轉(zhuǎn)MTEC1細胞凋亡;Th1細胞回遷胸腺實驗發(fā)現(xiàn):胸腺中可檢測到CFSE熒光染料標記的CD4+T細胞,證明活化的Th1細胞可以通過外周血循環(huán)回遷到胸腺中;通過初步的機制表明:經(jīng)IFN-γ處理的MTEC1細胞凋亡比例增加,Trx2和Bcl-2蛋白水平被下調(diào),Bax蛋白水平上調(diào)。在培養(yǎng)體系中再加入強力霉素后,MTEC1細胞凋亡有所逆轉(zhuǎn),且Trx2和Bcl-2蛋白水平增加。結(jié)論:外周炎癥或其他情況下活化的Th1細胞可從外周回遷到胸腺,有可能部分通過分泌IFN-γ上調(diào)Bax,抑制Trx2和Bcl-2誘導胸腺上皮細胞凋亡,而強力霉素可上調(diào)Trx2和Bcl-2表達,部分逆轉(zhuǎn)胸腺上皮細胞的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：Th1細胞 MTEC1細胞 IFN-γ 凋亡 Trx2
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文縮略表8-12
• 第一章 緒論12-19
• 1.1. 中樞免疫器官胸腺12-13
• 1.1.1. 胸腺的結(jié)構(gòu)12
• 1.1.2. 胸腺微環(huán)境12-13
• 1.1.3. 胸腺中T細胞的發(fā)育13
• 1.2. 胸腺萎縮及對胸腺結(jié)構(gòu)、微環(huán)境和T細胞的影響13-15
• 1.3. IFN-γ 與胸腺萎縮的關(guān)系15-17
• 1.3.1. IFN-γ 信號通路15-16
• 1.3.2. IFN-γ 與細胞凋亡16-17
• 1.3.3. IFN-γ 在胸腺萎縮時的作用17
• 1.4. 強力霉素的非抗生素作用17-19
• 第二章 研究目的、方法、實驗設計和意義19-21
• 2.1. 研究目的19
• 2.2. 研究內(nèi)容19
• 2.3. 研究方法19
• 2.4. 實驗設計方案19-20
• 2.4.1. 體外驗證Th1細胞可誘導MTEC1細胞凋亡19-20
• 2.4.2. 驗證外周的Th1細胞可回遷到胸腺20
• 2.4.3. 探討強力霉素對MTEC1細胞的保護作用20
• 2.5. 研究意義20-21
• 第三章 實驗材料與方法21-36
• 3.1. 試劑與耗材21-24
• 3.1.1. 試劑21-22
• 3.1.2. 主要儀器和耗材22-23
• 3.1.3. 主要溶液的配制23-24
• 3.2. 實驗方法24-35
• 3.2.1. 細胞培養(yǎng)24-29
• 3.2.2. MTEC1細胞凋亡檢測29-30
• 3.2.3. 小鼠注射技術(shù)30-31
• 3.2.4. MTEC1細胞RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄31-33
• 3.2.5. MTEC1細胞蛋白提取及蛋白印跡技術(shù)33-35
• 3.3. 統(tǒng)計分析35-36
• 第四章 實驗結(jié)果及討論36-57
• 4.1. Th1細胞的誘導及檢測36-38
• 4.1.1. CD4+ T細胞分選36-37
• 4.1.2. Th1細胞的誘導37-38
• 4.1.3. Th1細胞的檢測38
• 4.2. Th1細胞分泌IFN-γ 誘導胸腺上皮細胞系MTEC1細胞凋亡38-46
• 4.2.1. Th1細胞誘導MTEC1細胞凋亡38-40
• 4.2.2. Th1細胞上清誘導MTEC1細胞凋亡40-41
• 4.2.3. 阻斷共培養(yǎng)體系中INF-γ 信號部分MTEC1細胞凋亡被逆轉(zhuǎn)41-42
• 4.2.4. 阻斷Th1細胞上清中INF-γ 信號，，MTEC1細胞凋亡減弱42-43
• 4.2.5. IFN-γ 促進MTEC1細胞凋亡43-46
• 4.3. 外周Th1細胞可回遷到胸腺46-51
• 4.3.1. 外周活化的脾細胞回遷到胸腺46-49
• 4.3.2. 外周活化的T細胞回遷到胸腺49-50
• 4.3.3. 外周活化的CD4~+ T細胞可回遷到胸腺50-51
• 4.3.4. 外周Th1細胞可回遷到胸腺51
• 4.4. 強力霉素部分逆轉(zhuǎn)IFN-γ 誘導的MTEC1細胞凋亡51-54
• 4.4.1. 強力霉素抑制IFN-γ 誘導的MTEC1細胞凋亡51-52
• 4.4.2. IFN-γ 引起MTEC1細胞中Trx2和Bcl-2 蛋白下調(diào)，Bax蛋白上調(diào)52-53
• 4.4.3. 強力霉素可逆轉(zhuǎn)IFN-γ 引起的Trx2和Bcl-2 蛋白水平下調(diào)53-54
• 4.5. 討論54-57
• 第五章 主要結(jié)論及展望57-59
• 5.1. 主要結(jié)論57
• 5.2. 展望57-59
• 參考文獻59-64
• 文獻綜述 胸腺萎縮64-71
• 1.增齡性胸腺萎縮64-65
• 2.病原體感染引起的胸腺萎縮65-66
• 3.化學物引起的胸腺萎縮66-69
• 參考文獻69-71
• 致謝71-72
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章和參加的會議72

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