發(fā)布時間：2020-03-25 12:01

【摘要】： 目前認為肝干細胞是體內(nèi)存在的一種具有自我增殖能力和多向分化潛能的干 細胞，可以分化為肝細胞和膽管上皮細胞等多種細胞。但對肝干細胞的研究還是 以體內(nèi)實驗為主，，沒有成熟的分離培養(yǎng)肝干細胞的方法，而建立肝干細胞體外分 離培養(yǎng)方法和細胞模型，對其深入研究至關(guān)重要，也將為肝臟發(fā)生及其相關(guān)醫(yī)學(xué) 問題的探討提供一個理想的研究平臺。為此，我們從小鼠胚胎肝臟和成體肝臟兩 個方面同時入手，對建立肝干細胞體外分離培養(yǎng)方法進行了研究。首先為了確證 小鼠胎肝中肝干細胞的存在，對來自小鼠胎肝的細胞進行了移植實驗，發(fā)現(xiàn)受體 小鼠的脾臟有多個增生結(jié)節(jié)出現(xiàn)，而且形成的結(jié)節(jié)數(shù)與移植的細胞數(shù)之間存在正 相關(guān)關(guān)系。組織病理學(xué)和免疫組化分析表明，結(jié)節(jié)中的細胞呈現(xiàn)多種形態(tài)，并且 分別表達AFP、CD34、CK19等多種分子標志，從而證實在小鼠胎肝中存在著具 有多分化潛能的肝干細胞。然后，利用體外培養(yǎng)和體內(nèi)擴散盒培養(yǎng)技術(shù)對小鼠胎 肝細胞進行了分離培養(yǎng)，得到了表達AFP、CD34及Albumin等特異性分子標 志的細胞克隆，并能傳4-5代。另外，根據(jù)目前對于肝干細胞在成體肝臟中的定 位，利用門靜脈灌流消化法分離并建立了來源于成體小鼠肝臟的呈現(xiàn)上皮樣生長 的細胞系。體內(nèi)移植實驗表明，這一細胞不僅可在受體鼠內(nèi)增殖形成脾結(jié)節(jié)，而 且結(jié)節(jié)內(nèi)細胞可以表達肝細胞和膽管上皮細胞的特異性標志，表明這一細胞系具 有肝原始細胞的特性。最近，來自嚙齒類和人的移植實驗均表明，骨髓細胞可以 分化產(chǎn)生卵圓細胞，并進而生成肝細胞，從而引發(fā)了我們對于肝干細胞的可能來 源進行探討。通過Mx-cre~+雄性骨髓細胞被移植入雌性受體鼠內(nèi)，PCR分析和免 疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，受體鼠的部分肝細胞和膽管上皮細胞均有Mx-Cre的陽性 表達。另外，在受體鼠的其他多種組織，如腎臟、脾臟、皮膚等，也發(fā)現(xiàn)Mx-Cre culrure anJ ChCharacterizatjon of Mouse HepaticStem CeCek Absrracr 一 陽性細胞的存在。 這些方法和相應(yīng)細胞系的建立以及相關(guān)的探討將為肝干細胞廣泛而深入的研 究奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2599875