【摘要】：目的：克隆人白血病抑制因子(LIF)基因，構(gòu)建真核表達(dá)載體并進(jìn)行表達(dá)，檢測表達(dá)產(chǎn)物對HL-60白血病細(xì)胞的作用，同時觀察經(jīng)LIF基因修飾的ECV-304細(xì)胞對臍血造血干/祖細(xì)胞(HSC/HPC)體外培養(yǎng)的影響。 方法：采用RT-PCR技術(shù)克隆人LIF基因，構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.0-LIF。經(jīng)PCR、限制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定和DNA測序正確后用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別將pcDNA3.0-LIF真核表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入COS-7細(xì)胞和ECV-304人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，并通過G418篩選獲得能穩(wěn)定表達(dá)LIF的ECV-304轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。通過形態(tài)學(xué)觀察、MTT、FCM法研究COS-7細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物對HL-60細(xì)胞的影響；通過激光掃描共聚焦顯微鏡、FCM、免疫細(xì)胞化學(xué)分析研究ECV-304轉(zhuǎn)基因細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)的rhLIF與IL-24基因在誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡方面的協(xié)同作用；并用LIF基因修飾的ECV-304細(xì)胞與臍血CD34+細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測培養(yǎng)前后CD34+細(xì)胞及CD34+CD54+細(xì)胞數(shù)量的變化，觀察轉(zhuǎn)LIF基因的ECV-304細(xì)胞對臍血造血細(xì)胞的影響。 結(jié)果：成功獲得609bp的編碼人LIF蛋白的基因，序列測定結(jié)果與GenBank報道的LIF序列相比除有一個堿基發(fā)生同義突變外，，其余均一致；pcDNA3.0-LIF真核重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建正確，人LIF基因可在COS-7和ECV-304兩種細(xì)胞中進(jìn)行有效表達(dá)；表達(dá)產(chǎn)物對HL-60白血病細(xì)胞具有較
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2581097