發(fā)布時(shí)間：2018-11-06 18:51

【摘要】：人孕中期胎兒結(jié)膜上皮干細(xì)胞定位特征的初步研究 目的 本文參考有關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)用免疫組化方法研究孕中期不同胎齡胎兒結(jié)膜上皮細(xì)胞中，k7，k14，k19，P63和PCNA的表達(dá)及分布情況，探討人胎兒結(jié)膜上皮干細(xì)胞的定位特征。 材料和方法 1．材料選擇 取正常引產(chǎn)六小時(shí)內(nèi)的胎兒。17周兩例，19周兩例，20周兩例，23周兩例，合計(jì)8例16支眼。所有病例無(wú)遺傳病史和孕期感染史，且取材經(jīng)過胎兒家屬及醫(yī)院的許可。 2．組織標(biāo)本制備 連眼瞼取出完整眼球，除去皮膚及皮下軟組織(瞼緣保留)剪除后部鞏膜，取出玻璃體及色素膜，沿眼球矢狀面剪取眼球組織塊(呈窄條狀，包含瞼緣、全部瞼結(jié)膜、球結(jié)膜、穹隆部結(jié)膜和部分角膜組織)。40g／L多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。將組織蠟塊制成3-5μm的切片。 3．SP免疫組化染色 采用兩步法，嚴(yán)格按照SP試劑盒(購(gòu)自福建邁新公司)說明書程序操作，k7，k14，k19，P63和PCNA抗體(購(gòu)自邁新公司)的工作濃度為1∶100。取相應(yīng)切片按免疫組化SP法染色，切片脫蠟至水，新鮮配制30ml／LH_2O_2室溫孵育10min以滅活內(nèi)源性過氧化物酶：修復(fù)抗原，將切片放入檸檬酸緩沖液，微波爐加熱10min。待其自然冷卻后用正常兔血清室溫封閉20min，除去多余血清，滴加一抗(1∶150)，室溫孵育70min，PBS洗3次。滴加過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，室溫孵育15min，，PBS洗3次。DAB顯色4min，蘇木素復(fù)染，切片脫水，透明，封閉，空白對(duì)照以PBS代替一抗。K7、K14、K19
[Abstract]:Preliminary study on the localization of human fetal conjunctival epithelial stem cells in the second trimester of pregnancy objective to refer to relevant literature. Immunohistochemical method was used to study the expression and distribution of p63 and PCNA in human fetal conjunctival epithelial cells at different gestational ages, and to investigate the localization of human fetal conjunctival epithelial stem cells. Materials and methods 1. Materials were selected for fetuses within 6 hours of normal induction of labor. Two fetuses at 17 weeks, two cases at 19 weeks, two cases at 20 weeks, two cases at 23 weeks, Total 8 cases 16 eyes. All cases had no history of hereditary disease and infection during pregnancy, and the materials were obtained with the permission of fetal family members and hospitals. 2. Preparation of tissue specimen, removal of intact eyeball with eyelid, removal of skin and subcutaneous soft tissue (eyelid margin preservation), removal of posterior sclera, removal of vitreous body and pigment membrane, The ocular tissue mass was cut along the sagittal plane of the eyeball (narrow stripe, including eyelid rim, all eyelid conjunctiva, bulbar conjunctiva, fornix conjunctiva and part of cornea tissue). 40g/L polyformaldehyde was fixed, and conventional paraffin embedded. The tissue wax block was made into 3-5 渭 m slice. 3.SP immunohistochemical staining was performed by two-step method, and the procedure of SP kit (purchased from Fujian Mai Xin Company) was strictly followed. The working concentration of p63 and PCNA antibodies was 1: 100. The corresponding sections were stained with immunohistochemical SP method. The sections were dewaxed to water. 10min was incubated with 30ml/LH_2O_2 at room temperature to inactivate endogenous peroxidase: repair antigen. The slices were added to citric acid buffer solution and heated in microwave oven for 10 minutes. After natural cooling, the rabbit serum was blocked at room temperature for 20 min, and the superfluous serum was removed. The first antibody was added (1: 150), and incubated at room temperature for 70 min, the PBS was washed for 3 times. Streptavidin labeled by peroxidase was dripped and incubated at room temperature for 15 mins. DAB developed for 4 mins, hematoxylin was stained again, slice was dehydrated, transparent and closed. PBS was used to replace the first antibody. K7K14 K19 in blank control
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2315160