本文關(guān)鍵詞：重組Ⅱ型登革病毒NS1的表達(dá)及其免疫原性的研究

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【摘要】：目的:表達(dá)制備重組Ⅱ型登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1,檢測該重組表達(dá)蛋白的免疫原性,為檢測試劑盒的研制提供基礎(chǔ)。方法:根據(jù)Ⅱ型登革病毒NS1蛋白基因序列(GenBank登錄號:NC_001474),對基因序列進(jìn)行編碼密碼子優(yōu)化后進(jìn)行全基因合成,隨后,經(jīng)雙酶切將目的片段克隆到表達(dá)載體pET28a上,通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá);表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western blot鑒定后,進(jìn)一步進(jìn)行蛋白純化和透析復(fù)性,制備獲得重組Ⅱ型登革病毒NS1蛋白。收獲的NS1蛋白免疫小鼠,制備多克隆抗體,通過間接酶聯(lián)免疫學(xué)方法測定其效價,檢測其免疫原性。結(jié)果:成功構(gòu)建了Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表達(dá)載體。Western blot顯示表達(dá)的重組蛋白能夠被NS1單抗特異性的結(jié)合,純化復(fù)性后的重組蛋白在小鼠體內(nèi)表現(xiàn)出良好的免疫原性。結(jié)論:重組表達(dá)的NS1蛋白有良好的免疫原性,為以后的NS1單克隆抗體的制備和登革病毒檢測試劑盒的研制提供了良好的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院/中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81171946) 云南省科技廳社會發(fā)展科技計劃項(xiàng)目(2011CA016) 云南省自然科學(xué)基金(2009ZC187M,2012FB188)資助項(xiàng)目
【分類號】：R373
【正文快照】： 登革病毒(dengue virus,DENV)廣泛流行于全球熱帶、亞熱帶以及歐洲個別地區(qū)等10多個國家和地區(qū)⑴。每年超過一億人受感染,25億以上的人受到威脅,目前登革病毒的傳播現(xiàn)已經(jīng)成為一個日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題[2]。 登革病毒可以感染人類并導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床疾�、�。臨床上根據(jù)疾病嚴(yán)

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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7 趙玉嬌;潘s，

本文編號：1240841