本文關鍵詞：人氣管上皮細胞的原代分離及氣液界面培養(yǎng)

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【摘要】：目的分離人氣管上皮細胞,并進行氣液界面(air-liquid interface,ALI)培養(yǎng),為呼吸道病毒研究提供良好的細胞模型。方法采用低溫消化法分離人氣管上皮細胞,用預包被膠原的0.4μm Transwell培養(yǎng)皿對傳代后的氣管上皮細胞進行ALI培養(yǎng)。利用倒置顯微鏡觀察細胞生長狀態(tài),免疫細胞化學染色和免疫組化鑒定培養(yǎng)細胞的生長和分化情況,同時測定細胞分化過程中的跨上皮電阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)。結(jié)果分離培養(yǎng)的氣管上皮細胞光鏡下細胞形態(tài)及免疫熒光角蛋白染色陽性,證實培養(yǎng)細胞為氣管上皮細胞。ALI培養(yǎng)后的人氣管上皮細胞的形態(tài)學、MUC5AC蛋白、Ⅳ型β-微管蛋白(β-tubulinⅣ)的表達及緊密連接和假復層的形成情況均與人氣管組織結(jié)構類似。結(jié)論低溫消化法可成功分離到活性高的上皮細胞。ALI培養(yǎng)的上皮細胞形態(tài)和功能與體內(nèi)接近,且能較長時間維持其正常形態(tài)及功能,為呼吸道相關疾病的研究提供了理想的平臺。
【作者單位】： 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所;南京醫(yī)科大學附屬南京市兒童醫(yī)院;
【關鍵詞】： 氣管上皮細胞 原代分離 細胞培養(yǎng) 氣液界面
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 氣液界面(air-liquid interface,ALI)培養(yǎng)是將氣管上皮細胞接種在預鋪膠原的多孔支持物上進行培養(yǎng)的一種方法,培養(yǎng)成功后即會形成假復層纖毛柱狀上皮[1]。該模型培養(yǎng)的細胞在功能和結(jié)構上均貼近體內(nèi)氣管上皮細胞的自然生長狀態(tài),為研究氣管上皮的功能和相關疾病奠定了良好的基

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本文編號：905145