本文關(guān)鍵詞：FILIP-1L蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體制備

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【摘要】：目的:表達(dá)、純化GST-FILIP-1L融合蛋白,制備FILIP-1L多克隆抗體。方法:pGEX-4T3-FILIP-1L重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coliBL21大腸桿菌,IPTG誘導(dǎo)GST-FILIP-1L融合蛋白表達(dá),Glutathion Sepharse 4B純化GST-FILIP-1L融合蛋白。將純化的GST-FILIP-1L融合蛋白免疫新西蘭大耳白兔,制備FILIP-1L多克隆抗體,用ELISA方法檢測(cè)多克隆抗體效價(jià),Western blot檢測(cè)多克隆抗體與FILIP-1L蛋白、細(xì)胞轉(zhuǎn)染FILIP-1L蛋白及細(xì)胞FILIP-1L蛋白的結(jié)合能力。結(jié)果:在大腸桿菌中誘導(dǎo)出高表達(dá)的FILIP-1L融合蛋白,經(jīng)Glutathion Sepharse 4B純化后免疫新西蘭大耳白兔,獲得了高效價(jià)的抗FILIP-1L多克隆抗體,親和層析獲得純度較高的多克隆抗體,WB檢測(cè)顯示多克隆抗體能夠與FILIP-1L蛋白、293細(xì)胞轉(zhuǎn)染FILIP-1L蛋白及肝癌細(xì)胞FILIP-1L蛋白結(jié)合。結(jié)論:成功表達(dá)、純化了GST-FILIP-1L融合蛋白,制備了高效價(jià)的抗FILIP-1L多克隆抗體,為研究FILIP-1L蛋白生物學(xué)功能提供了有用的實(shí)驗(yàn)工具。
【作者單位】： 抗體藥物河南省工程實(shí)驗(yàn)室 河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞與分子免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： FILIP-L 融合蛋白 多克隆抗體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30971508)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 腫瘤細(xì)胞的遷移性與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)[1,2],腫瘤轉(zhuǎn)移是腫瘤患者死亡的重要原因,因此腫瘤侵襲及遷移的機(jī)制研究與臨床腫瘤治療策略的發(fā)展密切相關(guān)。FILIP-1L(Filamin A interacting protein 1-like,FILIP-1L;previously known as down-regulated inovarian cancer 1,DOC1)是

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本文編號(hào)：745122