本文關鍵詞：小鼠resistin基因慢病毒表達載體構建及在KMB17細胞中的表達

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【摘要】：[目的]構建攜帶小鼠resistin基因的慢病毒表達載體,并高效轉導靶細胞。[方法]從小鼠脂肪組織提取總RNA,經(jīng)PCR擴增、酶切、連接、轉化后構建重組質(zhì)粒;通過293T細胞包裝為重組慢病毒顆粒,然后感染KMB17細胞,檢測小鼠resistin基因在靶細胞中的表達。[結果]PCR擴增到預期的342 bp大小的resistin基因目的片段;構建的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切得到了342 bp大小的目的片段,測序鑒定為小鼠resistin基因序列;重組慢病毒包裝可觀察到很強的綠色熒光,說明具有較高的質(zhì)粒轉染效率;重組慢病毒感染KMB17后可檢測到小鼠resistin基因轉錄水平和蛋白水平的表達,證明resistin基因得到有效轉導并可在靶細胞中高水平表達。[結論]成功構建了攜帶小鼠resistin基因的慢病毒表達載體并可在KMB17靶細胞中獲得高效表達。
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所中國醫(yī)學科學院醫(yī)學靈長類動物研究中心云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點實驗室;
【關鍵詞】： resistin 慢病毒載體 靶細胞 表達 小鼠
【基金】：國家自然科學基金面上項目(“c AMP信號通路介導的FGF21對T2DM糖脂代謝的調(diào)控機制研究”,No.81570749) 云南省應用基礎研究面上項目(“FGF21和INS對1型糖尿病的聯(lián)合基因治療研究”,No.2013FB089) 協(xié)和青年基金和中央高�；究蒲袠I(yè)務費專項(“恒河猴resistin剪接體的發(fā)現(xiàn)及其對胰島素敏感性的調(diào)節(jié)作用與分子機制”,No.33320140083)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 胰島素抵抗是2型糖尿病(type 2 diabetes melli-tus,T2DM)發(fā)病的重要因素,在T2DM的發(fā)病過程中胰島素抵抗的作用較為突出,致使整個機體胰島素分泌相對不足進而使組織和細胞的胰島素敏感性降低[1]。大量研究表明,脂肪組織體積增大并使各種各樣的脂肪細胞因子的表達發(fā)生變化,例如

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