本文關(guān)鍵詞：儲運條件對人臍帶間充質(zhì)干細胞的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：近年來,干細胞在臨床中被廣泛應(yīng)用于退行性疾病、損傷性疾病及自身免疫病等多種疾病的治療中。目前熱門研究的干細胞類型包括：胚胎干細胞(ESC)、誘導(dǎo)多能干細胞(iPS)、成體干細胞(ASC)。胚胎干細胞分離于早期胚胎,具全能性,但建系需破壞胚胎,無法回避倫理問題。誘導(dǎo)多能干細胞可通過逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)生成,繞開了干細胞應(yīng)用的倫理問題,但仍無法保證病毒處理流程的安全性和體內(nèi)形成畸胎瘤的風(fēng)險。間充質(zhì)干細胞可從多種成人組織中分離得到并具多分化潛能,分離和制備流程相對簡單,體外培養(yǎng)周期短,體內(nèi)移植后可發(fā)揮組織修復(fù)、細胞因子分泌等功能,安全性和可控性較高,因此被廣泛應(yīng)用于大規(guī)模臨床治療和實驗當(dāng)中去。但在這些臨床應(yīng)用中,關(guān)于干細胞儲運過程中細胞狀態(tài)變化的跟蹤報道極少出現(xiàn),因而我們通過模擬體外運輸環(huán)境條件,用實驗數(shù)據(jù)揭示細胞運輸過程中存活率及活性的變化情況。內(nèi)容：1.從組織中分離培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細胞(UCMSCs),并參照標(biāo)準MSC相關(guān)特性進行驗證。2.檢測白蛋白、光照和儲運時間等不同外部條件對臍帶問充質(zhì)干細胞存活率的影響。方法：1.在無菌GMP層流實驗室環(huán)境下,用原代細胞貼壁法從臍帶中獲得間充質(zhì)于細胞(MSCs),并在37℃恒溫控制和5% CO2環(huán)境下進行傳代培養(yǎng),期間通過不同倍數(shù)光學(xué)顯微鏡調(diào)換不同背景,觀察普通及染色后的MSCs形態(tài)變化,拍照并記錄相關(guān)信息,包括細胞體積、核質(zhì)比、細胞增殖速度、細胞傳代次數(shù)等。2.用流式細胞儀檢測MSCs表面標(biāo)志物表達情況,并與國際標(biāo)準進行對照。3.將培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細胞分為實驗組和對照組,每組把3.15×109/L個細胞懸浮在3 mL生理鹽水中。其中實驗組加入1%白蛋白并避光保存,對照組分為不加白蛋白避光保存組和加白蛋白光照保存組,在0,2,4,8和24 h分別測定各組細胞數(shù)、臺盼藍拒染率和細胞存活率。結(jié)果：1.臍帶間充質(zhì)干細胞成功從臍帶中分離得到,為梭形且大多平行或漩渦式排列,染色后呈現(xiàn)較高的核質(zhì)比。2.間充質(zhì)干細胞表面標(biāo)志物CD29(93.2%)、CD44(96.5%)、CD73(99.74%)、 CD90(99.1%)、CD105(84.1%)和CD106(79.9%)高表達,CD34(0.4%)和CD45(0.1%)陰性表達。3.與對照組相比,實驗組(加白蛋白且避光)的8小時細胞損失率幾乎為零,細胞存活率接近90%。不加白蛋白對照組8小時細胞損失率達38.5%,細胞存活率僅為86%。結(jié)論：1.臍帶中分離得到的細胞具有MSCs最基本的生物學(xué)特性。2.在間充質(zhì)干細胞的長途運輸中,運輸介質(zhì)中加入1%白蛋白可以有效保證細胞存活率。運輸時間超出8小時后,細胞存活率降低、損失率升高。3.在16℃、避光的環(huán)境下,以1%白蛋白的生理鹽水為保存介質(zhì),臍帶間充質(zhì)干細胞在8小時內(nèi)均符合臨床輸注要求。
【關(guān)鍵詞】：臍帶 間充質(zhì)干細胞 白蛋白 光 存活率
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞表11-13
• 前言13-15
• 第一部分 實驗論文部分15-31
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 第二部分 綜述部分31-39
• 參考文獻39-42
• 致謝42-43
• 在學(xué)期間發(fā)表文章43-44
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表44

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本文編號：451144