本文關(guān)鍵詞：攜帶EGFP基因的戊型肝炎病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其感染性的驗(yàn)證，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了構(gòu)建攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染人肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞驗(yàn)證其感染性,PCR法分兩段擴(kuò)增HEV全基因組序列和EGFP基因序列,將EGFP報(bào)告基因插入到HEV ORF2基因下游,并克隆到體外轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體pGEM屮-7Zf(+)上。然后利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入A549細(xì)胞,24h后在熒光顯微鏡下觀察EGFP的表達(dá);轉(zhuǎn)染72h后,利用免疫熒光法檢測HEV ORF2蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染7d后將發(fā)生病變的A549細(xì)胞收集作為接種物,接種A549細(xì)胞驗(yàn)證攜帶EGFP的HEV-EGFP重組病毒的感染性。結(jié)果顯示經(jīng)酶切和測序鑒定攜帶EGFP的HEV重組表達(dá)質(zhì)粒pGEM-HEV-EGFP構(gòu)建成功;EGFP基因與HEV在A549細(xì)胞中可融合表達(dá);攜帶EGFP的HEV重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞7d后出現(xiàn)病變,并且連續(xù)傳代3代仍具有感染性。本研究成功構(gòu)建了攜帶EGFP的HEV全基因組重組質(zhì)粒pGEM-HEV-EGFP,并成功感染A549細(xì)胞,為進(jìn)一步研究HEV的復(fù)制機(jī)制及致病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;大連雅立峰生物制藥有限公司;云南省洱源縣右所鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站;
【關(guān)鍵詞】： 戊型肝炎病毒(HEV) 增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP) 感染性
【基金】：國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):31360619;81660338) 云南省自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):2013FB032) 中國博士后科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):2014M562672;2015T81138)
【分類號(hào)】：R373.21
【正文快照】： 3.大連雅立峰生物制藥有限公司,大連116000;4.云南省洱源縣右所鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,大理671200)戊型肝炎(Hepatitis E,HE)已成為一種全球性的疾病,戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是引發(fā)戊型肝炎的病原體,由HEV引起的病毒性肝炎每年大約2千萬例。戊型肝炎在許多發(fā)展中國家已成

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 付欣,李冰;重組質(zhì)粒的快速酚篩法的改進(jìn)[J];廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

2 徐琛蓉;章錦才;趙川江;張?zhí)N惠;;重組質(zhì)粒PcDNA3.1/sTNFRⅠ在小鼠體內(nèi)表達(dá)的初步研究[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

3 成桂明;楊慧蘭;;pGEX-4T-1/HSV2-gG重組質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年09期

4 王斌;質(zhì)粒DNA的構(gòu)型變化對轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用[J];遺傳學(xué)報(bào);1987年01期

5 張秀華;;重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);1991年03期

6 熊占;質(zhì)粒DNA快速提取法[J];江西科學(xué);1995年04期

7 康小燕;蔣志偉;郁磊;羊揚(yáng);舒燕;姚豐華;朱國強(qiáng);;重組質(zhì)粒pACYC184-hok/sok的構(gòu)建及穩(wěn)定性研究[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年03期

8 齊義鵬,黃永秀;昆蟲病毒重組質(zhì)粒的快速提取[J];病毒學(xué)報(bào);1987年02期

9 李維琪,唐桂芳,趙明安,劉敏;重組質(zhì)粒分子量不均一性的電鏡觀察[J];石河子農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);1992年03期

10 鄧寧;重組質(zhì)粒DNA的提取和純化方法研究[J];黃淮學(xué)刊(自然科學(xué)版);1996年S4期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余勝兵;馮艾榮;周平;胡繼明;;一種新的毛細(xì)管電泳動(dòng)態(tài)涂層介質(zhì)在質(zhì)粒DNA分離中的應(yīng)用[A];中國化學(xué)會(huì)第十三屆有機(jī)分析與生物分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

2 李夢南;任大明;王磊;肖偉;鄭廣宏;;重組質(zhì)粒DNA在熱處理過程中的降解/變性規(guī)律研究[A];上海市化學(xué)化工學(xué)會(huì)2007年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2007年

3 李迪;谷鴻喜;張鳳民;鐘照華;程志;;pQE32-HPV18 L1重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會(huì)成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

4 劉茂軍;張映;邵國青;聶向庭;;重組質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)及活性鑒定[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國反芻動(dòng)物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

5 趙燕;童富淡;;家蠶HMGA(BmHMGA)表達(dá)及功能初步研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

6 徐麗;彭景ii;;重組質(zhì)粒pCR3.1-brZPC'的表達(dá)及其抗生育作用[A];第九次全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2003年

7 章軍;秦燕;徐虹;陳天圣;樓士林;;利用穿梭表達(dá)重組質(zhì)粒在藍(lán)藻Synechococcus sp.PCC7942中表達(dá)胸腺素α_1[A];中國藻類學(xué)會(huì)第十一次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

8 高方友;楊輝;張治元;何家全;劉仕勇;邱克軍;;重組質(zhì)粒pEGFP-mD1x5的構(gòu)建及其在室管膜前下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第七屆學(xué)術(shù)交流會(huì)暨神經(jīng)外科學(xué)新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2006年

9 齊眉;卞繼峰;趙蔚明;于修平;賈繼輝;周亞濱;欒怡;;病毒HPV16L1-E7C重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其細(xì)胞免疫性的初步研究[A];山東免疫學(xué)會(huì)、山東微生物學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)2001年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2001年

10 賀艷芬;汪亮亮;頡孝賢;李加琪;;莢膜紅細(xì)菌SQR基因的克隆及重組質(zhì)粒的構(gòu)建[A];中國動(dòng)物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國動(dòng)物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張泉;重組質(zhì)粒DNA的規(guī)�；a(chǎn)工藝及質(zhì)量鑒定研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

2 朱鴻飛;重組質(zhì)粒pcDNAKCpG生物安全性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

3 崔福愛;BMP-6和VEGF表達(dá)載體的構(gòu)建及其促進(jìn)成骨作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王穎慧;表達(dá)HBsAg基因的重組質(zhì)粒與重組腺病毒的免疫學(xué)初步研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2014年

2 李夢南;熱處理廢棄重組質(zhì)粒DNA的有效性與安全性分析[D];同濟(jì)大學(xué);2008年

3 李茜;pcDNA3.1-preS1-GFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在小鼠精子內(nèi)的表達(dá)[D];青島大學(xué);2010年

4 張戰(zhàn)鋒;細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶2重組質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

5 黃麗春;酵母代謝木糖產(chǎn)乙醇重組質(zhì)粒的構(gòu)建[D];廈門大學(xué);2009年

6 楊媚娜;β轉(zhuǎn)化生長因子受體Ⅱ啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建[D];吉林大學(xué);2012年

7 盧鈞雄;端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶C端重組質(zhì)粒構(gòu)建與表達(dá)及對細(xì)胞增殖和活力的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

8 陳曉麗;重組質(zhì)粒βhCG-pPIC9K的構(gòu)建及在酵母細(xì)胞中的表達(dá)[D];暨南大學(xué);2001年

9 饒澤昌;PNP基因克隆及其表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[D];南昌大學(xué);2008年

10 王志峰;日本腦炎病毒核心蛋白編碼基因重組質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：攜帶EGFP基因的戊型肝炎病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其感染性的驗(yàn)證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：405866