Austin(1951)和Chang(1951)分別報(bào)道,家兔精子進(jìn)入雌性生殖道,與卵子結(jié)合形成受精卵之前,獲得使精子受孕的能力,稱之為‘獲能’。獲能后的精子發(fā)生超激活運(yùn)動(dòng)、質(zhì)膜膽固醇含量減少、酪氨酸磷酸化增強(qiáng)和引發(fā)頂體反應(yīng)等,并且大量研究表明酪氨酸磷酸化對于精子的獲能尤為重要,但是其完整的分子機(jī)制和信號通路始終不是很清楚。本課題旨在發(fā)現(xiàn)人類精子獲能過程中新的發(fā)生磷酸化修飾改變的蛋白,以及關(guān)鍵酪氨酸磷酸化激酶,并進(jìn)行其功能性研究,為臨床相關(guān)疾病提供診斷和治療的候選分子靶標(biāo)。為了全面的發(fā)現(xiàn)精子獲能過程中哪些蛋白質(zhì)發(fā)生了磷酸化修飾的改變,我們運(yùn)用IMAC-TiO2磷酸肽雙富集和LTQ Orbitrap Velos質(zhì)譜儀相結(jié)合的非標(biāo)記定量策略,構(gòu)建了正常人類精子獲能前后(體外獲能培養(yǎng)Oh、2h)磷酸化修飾差異譜,共鑒定3350個(gè)磷酸化肽段,1017個(gè)磷酸化蛋白。t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì),獲能后磷酸化水平升高2倍以上的磷酸化蛋白有99個(gè),獲能后磷酸化水平下降2倍以上的磷酸化蛋白有11個(gè),獲能后磷酸化水平升高2倍以上的酪氨酸磷酸化蛋白有18個(gè),獲能后磷酸化水平下降2倍以上的酪氨酸磷酸化蛋白僅有1個(gè)。此外,對磷酸...

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１；?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ確定了獲能前精子和獲能后精子（獲能１小時(shí)、２小時(shí)和３??

獲能比的精子與獲能前的精子相比酪氨酸礎(chǔ)酸化水平幾乎沒有變化，獲??能化的精子的酪氨酸憐酸化水平明顯增強(qiáng)，獲能３ｈ的精子與獲能２ｈ相比酪氨??酸礎(chǔ)酸化水平有所下降，但仍然高于獲能前的精子（圖１）。??Ｈｏｕｒｓ?ａｆｔｅｒ?ｃａｐａｄｔａ巧ｏｎ??ＭＷ（ｋＤａ）?Ｐｒｅ?１?２?３....

圖２．１：人類精子獲能前后磯酸化差異修飾譜系構(gòu)建的策略圖

?南京佐科大學(xué)巧±學(xué)位論文??２、無標(biāo)記定量策略的應(yīng)用Ｗ及質(zhì)譜鑒定結(jié)果??基于Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們收集了獲能前和獲能化的精子標(biāo)本，兩??沮標(biāo)本處理后進(jìn)行無標(biāo)記定量，稱酸化富集后質(zhì)譜鑒定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)Ｓ次（圖??２．１）。??

圖２．２；差異修飾憐酸化蛋白的表達(dá)分布圖

化修飾差異譜系，共鑒定出３３５０個(gè)稱酸化位點(diǎn)，１０１７個(gè)憐酸化蛋白。＾檢驗(yàn)統(tǒng)??計(jì)顯示，獲能后憐酸化水平升高２倍＾文上的稱酸化蛋白有９９個(gè)，獲能后憐酸化??水平下降２倍Ｗ上的憐酸化蛋白有１１個(gè)（ｐ＜０．０５）（圖２．２）；獲能后憐酸化水平升??高２倍Ｗ上的酪氨酸憐酸化蛋白有１８個(gè)....

圖２．３：差異修飾酪氨酸憐酸化蛋白的表達(dá)分布圖

化修飾差異譜系，共鑒定出３３５０個(gè)稱酸化位點(diǎn)，１０１７個(gè)憐酸化蛋白。＾檢驗(yàn)統(tǒng)??計(jì)顯示，獲能后憐酸化水平升高２倍＾文上的稱酸化蛋白有９９個(gè)，獲能后憐酸化??水平下降２倍Ｗ上的憐酸化蛋白有１１個(gè)（ｐ＜０．０５）（圖２．２）；獲能后憐酸化水平升??高２倍Ｗ上的酪氨酸憐酸化蛋白有１８個(gè)....

本文編號：4024461