發(fā)布時間：2017-05-27 01:05

  本文關鍵詞：艱難梭菌毒素A原核表達及重組蛋白純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構建艱難梭菌(Clostridium difficile,C.difficile)毒素A羧基末端原核表達載體,優(yōu)化誘導表達條件及純化重組蛋白。方法利用聚合酶鏈式反應擴增C.difficile毒素A羧基末端基因序列,并將此序列轉入pET-28b載體,構建pET-28b-tcdA重組表達載體,并將表達載體轉化到BL21(DE3)感受態(tài)大腸埃希菌細胞中,分別在不同條件下進行誘導表達,獲得最佳誘導表達條件后進行大量表達,最后用Ni柱對重組蛋白進行親和純化,得到純化后的重組蛋白。結果成功構建了pET-28b-tcdA重組表達載體,其重組蛋白表達最佳誘導條件:菌液吸光度值取0.6、溫度取25℃、IPTG終濃度取1.0mmol/L、誘導時間取10h。蛋白純化咪唑磷酸鹽洗脫液最佳濃度取200mmol/L。結論成功構建pET-28b-tcdA重組表達載體,在大腸埃希菌BL21(DE3)中可以有效表達,并獲得高濃度重組蛋白,為進一步制備TcdA適配子奠定了一定實驗室基礎。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學金域檢驗學院;
【關鍵詞】： 艱難梭菌毒素A 原核表達 重組蛋白純化
【基金】：廣州市科技計劃項目書(201510010241)
【分類號】：R378.8
【正文快照】： 艱難梭菌(Clostridium difficile,C.diffi-cile)產生的毒素A和B是其引起艱難梭菌相關感染(Clostridium difficile-associated infection,CDI)的物質基礎,兩種毒素分別由位于C.dif-ficile致病性決定區(qū)的兩個染色體基因tcdA與tcdB編碼[1],這兩種毒素均是單葡萄糖轉移酶,有著相似

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊道理,李保昌;蛋白質純化的方法選擇[J];實用醫(yī)藥雜志;2004年12期

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本文編號：398489