目的建立原代大鼠胸腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)方法,為研究心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病提供重要的載體和工具細(xì)胞。方法選取6～8周齡SD大鼠2只,剪開胸腹腔,剝離主動(dòng)脈,刮除血管內(nèi)、外膜,經(jīng)0.2%Ⅱ型膠原酶/彈性蛋白酶消化后,剪碎成塊,種瓶進(jìn)行原代培養(yǎng)。通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、α平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定所培養(yǎng)的目的細(xì)胞。結(jié)果接種于培養(yǎng)瓶中的血管組織塊培養(yǎng)48h后開始貼壁;72h后細(xì)胞以組織塊為中心,向外遷移,"島嶼狀"細(xì)胞團(tuán)簇初步形成;96h后原代細(xì)胞集落逐漸融合,鋪滿瓶底,呈現(xiàn)典型的"峰-谷"樣生長(zhǎng);第一代傳代細(xì)胞形態(tài)基本保持不變,高倍鏡下細(xì)胞呈三角形或星形。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,細(xì)胞α平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性率達(dá)99%以上。結(jié)論復(fù)合酶消化法結(jié)合組織塊法能夠成功高效地分離培養(yǎng)出原代大鼠胸腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞。

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【文章目錄】：
材料和方法
    1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 主要試劑
    3 主要儀器
    4 血管平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)
    5 血管平滑肌細(xì)胞傳代培養(yǎng)
    6 形態(tài)學(xué)觀察
    7 α平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)
結(jié)果
討論



本文編號(hào)：3790375