目的應用環(huán)介導等溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）建立針對溶藻弧菌gyrB基因的快速檢測方法。方法以溶藻弧菌標準株（ATCC-17749）和溶藻弧菌野生株（WT）為研究對象,通過在線生物學軟件（http://primerexplorer.jp/e/）設計針對溶藻弧菌gyrB基因的LAMP引物,利用恒溫水浴進行等溫擴增,優(yōu)化反應條件,建立快速檢測方法。結果①經2g/dl凝膠電泳結果顯示反應溫度為61℃時擴增產物成像效果較60℃,62℃和63℃明顯,為適宜反應溫度;②在61℃條件下反應60 min和90 min凝膠電泳成像效果差異不大,反應時間為60 min能滿足擴增需要;③利用同一體系對臨床6種其它常見致病菌進行等溫擴增時未出現陽性條帶,提示整個體系特異度較好;④采用模板稀釋法驗證該LAMP體系檢測的靈敏度為10-4mg/L。結論建立了基于LAMP技術針對溶藻弧菌gyrB基因的快速檢測方法,具有良好的特異度和敏感度,對快速檢測溶藻弧菌有重要意義。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 研究對象
    1.2 試劑和儀器
    1.3 方法
        1.3.1 細菌核酸粗提物制備：
        1.3.2 LAMP反應體系：
        1.3.3 反應溫度的優(yōu)化：
        1.3.4 反應時間的優(yōu)化：
2 結果
    2.1 不同溫度下擴增效果的比較
    2.2 不同反應時間擴增效果的比較
    2.3 特異性評價
    2.4 靈敏度評價
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3723920