發(fā)布時間：2022-01-23 09:29

　　目的構建含有人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus,hRSV）核蛋白（nucleoprotein,N）、磷蛋白（phosphoprotein,P）和轉錄延長/終止抑制因子（transcription elongation/antitermination factor M2-1,M2-1）蛋白編碼基因的表達載體,并轉染BSR T7/5細胞,鑒定蛋白的表達。方法根據(jù)hRSV蘭州株（LZ01/09）的N、P和M2-1基因序列設計3對特異性引物,以pcDNA-N、pcDNA-P和pcDNA-M2-1質粒為模板,PCR擴增N、P和M2-1基因片段,與pGEM-T載體連接,構建亞克隆載體;再通過體外酶切連接將內(nèi)部核糖體進入位點（internal ribosome entry site,IRES）序列克隆至p RSV7載體T7啟動子表達盒基因的上游,構建基本表達載體p7IK;通過酶切連接構建表達載體p7IK-N、p7IK-P和p7IK-M2-1,轉染BSR T7/5細胞,采用Western blot法鑒定蛋白的表達。結果亞克隆載體、基本表達載體和表達載體... 

【文章來源】：中國生物制品學雜志. 2019,32(11)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞及質粒
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設計及合成
    1.4 N、P、M2-1基因的擴增及克隆
    1.5 基本表達載體的構建
    1.6 表達載體的構建
    1.7 細胞轉染及蛋白表達的檢測
2 結果
    2.1 亞克隆載體的鑒定
    2.2 基本表達載體的鑒定
    2.3 表達載體的鑒定
3 討論



本文編號：3604071