目的分析成都某部感染乙型流感病毒遺傳進化與血凝素（HA）基因突變位點。方法通過犬腎上皮細胞（MDCK細胞）體外分離患者咽拭子標本流感病毒毒株,用PCR獲取乙型流感病毒HA基因并測序,與NCBI數(shù)據(jù)庫在線比對并利用MEGA 6.06軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹,分析突變位點。結(jié)果通過MDCK細胞接種,分離出1株乙型流感病毒株,以感染病例咽拭子核酸及分離毒株的核酸為模板進行PCR擴增得到1 755 bp全長HA基因,獲得的序列提交至GenBank數(shù)據(jù)庫,獲得基因登錄號為MH236281。通過在線比對及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建,該病例感染的病毒為Yamagata系乙型流感病毒。與乙型流感病毒Yamagata系的代表毒株Influenza B/Yamagata/16/88（GenBank No. M36105）相比,HA基因點突變堿基為57個;與世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的疫苗株Influenza B/Utah/08/2014 （Gen Bank No. KU592766）相比,突變堿基數(shù)為20個。進一步對HA1氨基酸突變位點進行分析,與四川地區(qū)往年流行株相比均發(fā)生了不同程度的突變,其中與2010年四川溫江的... 

【文章來源】：第二軍醫(yī)大學學報. 2019,40(11)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

乙型流感病毒的分離培養(yǎng)Fig2IsolationandincubationofinfluenzaBvirus圖

?崳壞惴⑸?吮湟歟?直鷂?L176Q和M255V，這2個位點均不在乙型流感病毒HA1上的抗原決定簇區(qū)域內(nèi)。值得一提的是，HA1的176位點是一個全新的突變，以往四川流行毒株、Yamagata系的代表毒株InfluenzaB/Yamagata/16/88(GenBankNo.M36105)及WHO推薦的疫苗株InfluenzaB/Utah/08/2014（GenBankNo.KU592766）的HA1176位點均為亮氨酸（leucine，L），而本研究病例感染的乙型流感毒株HA1176位點突變?yōu)楣劝滨０罚╣lutamine，Q），其突變意義仍有待深入研究。圖3免疫熒光檢測乙型流感病毒感染的MDCK細胞內(nèi)核蛋白表達Fig3ImmunofluorescencedetectionofnucleoproteinexpressioninMDCKcellsinfectedwithinfluenzaBvirusMDCK:Madin-Darbycaninekidney.Originalmagnification:×10010102103VirusgradientdilutionFig2IsolationandincubationofinfluenzaBvirusOriginalmagnification:×100圖3免疫熒光檢測乙型流感病毒感染MDCK細胞內(nèi)核蛋白表達Fig3ImmunofluorescencedetectionofnucleoproteinexpressioninMDCKcellsinfectedwithinfluenzaBvirusMDCK:Madin-Darbycaninekidneycell.Originalmagnification:×100以感染病例咽拭子和分離毒株提取的病毒核酸為模板，均可擴增出大小為1755bp的目的片段（圖4），二者測序序列一致，提交至，二者測序序列一致，提交至GenBank數(shù)據(jù)庫，獲得數(shù)據(jù)庫，獲得GenBank登錄號為MH236281。Fig2IsolationandincubationofinfluenzaBvirusOriginalmagnification:×100圖3免疫熒光檢測乙型流感病毒感染MDCK細胞內(nèi)核蛋白表達Fig3ImmunofluorescencedetectionofnucleoproteinexpressioninMDCKcells

為MH236281。Fig2IsolationandincubationofinfluenzaBvirusOriginalmagnification:×100圖3免疫熒光檢測乙型流感病毒感染MDCK細胞內(nèi)核蛋白表達Fig3ImmunofluorescencedetectionofnucleoproteinexpressioninMDCKcellsinfectedwithinfluenzaBvirusMDCK:Madin-Darbycaninekidneycell.Originalmagnification:×100以感染病例咽拭子和分離毒株提取的病毒核酸為模板，均可擴增出大小為1755bp的目的片段（圖4），二者測序序列一致，提交至GenBank數(shù)據(jù)庫，獲得GenBank登錄號為MH236281。圖4乙型流感病毒HA基因PCR產(chǎn)物電泳圖Fig4ElectrophoresisofPCRproductoftheinfluenzaBHAgeneHA:Hemagglutinin;M:Marker;1:Throatswabnucleicacidastemplate;2:Isolatedvirusstrainnucleicacidastemplate圖5基于HA基因的系統(tǒng)發(fā)育進化樹Fig5PhylogeneticevolutionarytreebasedontheHAgeneThe20171123(MH236281)isthesequenceobtainedinthisstudy.ThenumbersinparenthesesindicatetheaccessionnumberinGenBank.Thenumberateachbranchpointsisthepercentagesupportedbybootstrap.Bar:0.01sequencedivergence.HA:Hemagglutinin圖4乙型流感病毒HA基因PCR產(chǎn)物電泳圖Fig4ElectrophoresisofthePCRproductoftheinfluenzaBHAgeneagglutinin;M:Marker;1:Throatswabnucleicacidastemplate;2:Isolatedvirusstrainnucleicacidastemplate病毒HA基因系統(tǒng)發(fā)育進化樹HA基因核酸序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹，結(jié)果如圖5所示，本研究感染病例HA基ankNo.MH236281）均與Yamagata系的代表毒株InfluenzaB/Yamagata/16/88No.M36105）處在相同的進化分枝上，而與Victoria系的代表毒株Influenz

【參考文獻】：
期刊論文
[1]今年我國流感流行的深度解析[J]. 周密,李雷雷,毛晨梅,胡必杰.  中華醫(yī)院感染學雜志. 2018(04)



本文編號：3603827